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血管内皮细胞和平滑肌细胞是血管组织工程的重要研究对象。现有的在组织工程血管生物材料相容性检测中应用的成年大鼠主动脉平滑肌细胞培养难度大,成功率低,限制了其在材料相容性检测中的应用。因此,为了寻找一种更易获得的原代血管平滑肌细胞来源,本实验将取材自24h乳鼠SD大鼠主动脉,4周龄成年SD大鼠主动脉,4周龄成年SD大鼠门静脉的血管中膜组织用贴块法做原代培养,并比较细胞游出的结果。结果表明,24h乳鼠SD大鼠主动脉和4周龄SD大鼠门静脉组织块可以在培养第3天观察到游出细胞,而4周龄成年SD大鼠主动脉在观察的八周内未观察到有细胞游出。取材自乳鼠的主动脉血管较取自成年鼠的主动脉血管更易通过原代培养获得细胞。取自静脉的组织块较取材于动脉的组织块更易培养成功。
为了探索更加高效的组织贴块法,本实验采取保留内膜培养方法进行细胞培养,将4周龄大鼠门静脉做保留内膜和刮除内膜的培养,结果保留内膜的组织培养成功,而刮除内膜的培养失败,表明内膜完整性对于细胞游出的重要作用。
乳鼠主动脉平滑肌细胞相对成年鼠动脉平滑肌细胞具有分泌弹性蛋白,组装弹性纤维的特性,而可应用于有关弹性蛋白的生物材料相容性检测,本实验培养了乳鼠主动脉平滑肌细胞至第8周,并观察细胞的生长特性。
细胞的种植技术是组织工程血管的重要环节,管状支架的几何构型阻碍了细胞在支架上的黏附和增殖。管状支架种植的设备国内外文献均有报道,但装置复杂昂贵,因此,本实验自制了种植装置,用PMMA,一次性输液器部件,三通装置构建的简易装置达到无毒无污染,无泄漏,全透明,透气性良好的要求。实验采用静电纺丝法制备P(LLA-CL)(50:50)纳米纤维管状支架,利用此装置将适合浓度的内皮细胞PIECs种植在支架内腔表面。