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第一部分Ghrelin对大鼠骨髓内皮祖细胞体外生物学活性的影响目的探讨生长激素促分泌物受体的内源性配体（ghrelin）对大鼠骨髓内皮祖细胞(EPCs)体外生物学活性的影响。方法采用密度梯度离心法分离获得大鼠骨髓的EPCs，以细胞结合FITC所标记的荆豆凝集-l(FITC-UEA-1)、吞噬Dil所标记的乙酰化低密度脂蛋白(Dil-acLDL)进行EPCs检测，并使用CD34、CD133、人血管性血友病因子(vWF)和血管内皮细胞生长因子(VEGF)的酪氨酸激酶受体(Flk-1)等抗体进行免疫细胞化学染色法来鉴定细胞。使用不同浓度的ghrelin(10-9～10-6mol/L)孵育EPCs后，通过WST-8法检测EPCs的增殖能力、Transwell小室迁移实验检测EPCs迁移能力、在Matrigel基质胶上检测EPCs小管样结构形成能力、Griess法检测EPCs细胞培养上清液中一氧化氮（NO）含量。结果新分离培养1天内的内皮祖细胞近似圆形，第4～7天后转化为梭状的贴壁细胞，培养第10天细胞呈条索样排列生长。FITC-UEA-1和Dil-acLDL双染阳性，CD34、CD133、vWF和Flk-1免疫细胞化学染色均呈阳性。分别用浓度为10-9～10-6mol/L的ghrelin干预EPCs，发现10-8mol/L及10-7mol/L的ghrelin可明显促进EPCs的增殖、迁移、小管样结构形成及NO分泌(P<0.05)。结论Ghrelin呈一定的浓度依赖性地促进EPCs的增殖、迁移、小管样结构形成及NO分泌等生物学活性，提示其可能成为治疗缺血性疾病的新策略。第二部分ghrelin促进大鼠骨髓内皮祖细胞体外生物学活性的机制研究目的探讨ghrelin促进EPCs生物学活性的信号分子机制方法用不同浓度ghrelin(10-9～10-6mol/L)处理EPCs15min，并用10-7mol/L的ghrelin干预0～60min，使用Western-blot检测蛋白激酶B(Akt)、内皮型一氧化氮合酶(eNOS)及其磷酸化表达；分别用GHSR1a抑制剂[D-Lys3]-GHRP-6、磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)的抑制剂LY294002和eNOS的抑制剂L-NAME预先处理EPCs，检测其对ghrelin介导的Akt、eNOS磷酸化的表达及细胞增殖、迁移、小管样结构形成及NO分泌影响。结果Ghrelin呈剂量依赖性及时间依赖性地促进EPCs表达磷酸化Akt和eNOS；GHSR1a抑制剂[D-Lys3]-GHRP-6能显著抑制ghrelin诱导的Akt、eNOS磷酸化表达；PI3K抑制剂LY294002能显著抑制ghrelin诱导的Akt、eNOS的磷酸化表达；eNOS的抑制剂L-NAME能显著抑制ghrelin诱导的eNOS磷酸化表达，但是对Akt磷酸化表达无影响。同时，[D-Lys3]-GHRP-6、LY294002及L-NAME均能显著抑制ghrelin诱导的EPCs的增殖、迁移、小管样结构形成及NO分泌(P＜0.05)。结论Ghrelin通过激活GHSR1a/PI3K/Akt/eNOS信号途径促进骨髓EPCs增殖、迁移、小管样结构形成及NO分泌等体外生物学活性目的探讨危重症患者的血浆活性ghrelin水平的变化及可能的机制。方法选择ICU危重症患者127名，另选30名健康体检者为对照组。应用酶联免疫吸附试验测定血浆活性ghrelin、肿瘤坏死因子α (TNF-α)、白介素6（IL-6）水平，同时记录相关临床数据。结果（1）危重症患者血浆活性ghrelin水平高于健康对照组(P<0．01）；（2）根据APACHE lI评分≥15分及<15分将患者分为高危组及低危组后，高危组患者血浆活性ghrelin水平高于低危组（P <0．05）；（3）危重症患者血浆活性ghrelin水平与体质量指数（BMI）呈负相关呈负相关(r=-0.536，P <0．01)，与TNF-α、IL-6呈正相关(r=0.275,P <0．05； r=0.452, P <0．01)。多元线性逐步回归分析提示IL-6是影响血浆活性ghrelin水平的独立相关因素。结论活性ghrelin在危重症患者外周血中高表达，可能与危重症状态下营养不良及高炎性反应有关，其浓度值的测定有助对病情危重程度的评估。