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噬菌体抗体库技术为人抗体的制备提供了强有力的手段，是近年来抗体技术中的革命性进展。我们用经肝癌细胞体外免疫的淋巴细胞构建了表面表达Fab的人源性噬菌体抗体库，并筛选出两个特异性与肝癌细胞结合而不与正常肝细胞结合的Fab噬菌体克隆。 淋巴细胞的分离和体外培养 淋巴细胞来源于13例原发性肝癌病人外周血单个核细胞和一例肝癌病人的肿瘤引流区淋巴结。分离得到的淋巴细胞在体外进行培养，培养液中含有IL-2，PWM和LPS。肝癌细胞系SMMC-7721用细胞固定液固定或经。60Co照射后，加入淋巴细胞培养液中，进行体外免疫。培养7天后出现胞体增大的淋巴母细胞并可见克隆性增生。 人Fab抗体库的构建 从体外培养的淋巴细胞中提取总RNA，并用一套引物逆转录PCR扩增出7种Fd基因（γ）和9种全长轻链基因（6λ，3κ）。通过将轻链基因和重链Fd基因插入噬菌体表达载体pComb3并经辅助噬菌体VCSM13超感染，构建了人Fab组合抗体库。用羊抗人IgG Fab和HRP-羊抗人IgG Fab进行夹心ELISA检测，可以鉴定噬菌体表达Fab的情况。 抗体库的筛选 将抗体库与肝癌细胞系SMMC-7721孵育，结合的噬菌体用Ph2.2的洗脱缓冲液洗脱，并感染XL1-Blu进行增殖。为了提高肝癌特异性结合的噬菌体并降低无关噬菌体的结合，我们采用了竞争筛选方法。首先将抗体库与肝癌细胞结合，然后稀释到过量的正常肝细胞悬液中，