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目的：（1）在大鼠心肌细胞缺氧预处理（ischemic preconditioning，IPC）晚期保护作用模型上，探讨丝裂素活化蛋白激酶P38（P38MAPK）、诱生型一氧化氮合成酶（iNOS）、环氧化酶-2（COX-2）和线粒体K+ATP通道的作用及相互关系。（2）在大鼠心肌细胞模型上，观察硝酸甘油预处理对心肌细胞的保护效应，以及P38MAPK、iNOS、COX-2和线粒体K+ATP通道在其中的作用，并探讨它们间的相互关系。（3）观察缺氧预处理对成纤维细胞的作用，缺氧预处理成纤维细胞对心肌细胞的保护作用及P38MAPK、iNOS、COX-2和线粒体K+ATP通道在其中的作用。（4）观察缺氧预处理心肌细胞对正常心肌细胞的保护作用。方法：根据实验的要求设置分组，每组4-6例。用Western blotting 法测定心肌细胞中磷酸化P38MAPK（ phospho-P38MAPK）、iNOS和COX-2的水平，并采用免疫组化法观察它们在心肌细胞中表达部位；用RT-PCR法测定心肌细胞中COX-2 mRNA的表达。观察特异性抑制剂SB203580、SMT、NS398和5-HD干预后，P38MAPK、iNOS、 COX-2和线粒体K+ATP通道在IPC晚期心肌保护中的作用；以乳酸脱氢酶（LDH） 和台盼蓝排斥试验判断心<WP=9>肌细胞损伤程度。数据以均数±标准差（）表示。用SPSS统计分析软件包的ANOVA和Chi-square test进行统计处理，以P<0.05为差异显著水准。结果：1.大鼠心肌细胞IPC晚期保护作用中P38MAPK、iNOS 、COX-2和线粒体K+ATP通道的作用及相互关系：phospho-P38MAPK在IPC后 24h达高峰，48h 后开始降低，96h 与IPC前接近。在IPC前，phospho-P38MAPK在胞浆有少量表达，而IPC后48h，phospho-P38MAPK表达量较高，主要位于胞核，呈深棕色。iNOS在IPC后24h已明显高于IPC前，48h时达高峰，72h后开始降低，96h 时与IPC前接近。COX-2 mRNA在IPC后1h己明显表达，3h时继续增高，24h时降到处理前水平。COX-2蛋白表达与iNOS类似。免疫组化显示：在IPC前，iNOS和COX-2在胞浆弱表达，核膜周围稍多；而IPC后iNOS和COX-2表达量较高，也位于胞浆，呈深棕色。IPC后,心肌细胞对后续致死性缺氧产生了抵抗（晚期保护），P38MAPK、iNOS 和COX-2特异性抑制剂SB203580、SMT 和NS398皆能取消IPC晚期保护作用； SB203580能抑制iNOS和COX-2表达；SMT能抑制COX-2表达，但不抑制P38MAPK活化； NS398不影响P38MAPK活化和iNOS表达。线粒体K+ATP通道开放剂二氮嗪（DZX）能模拟IPC晚期保护作用；IPC前给予线粒体K+ATP通道抑制剂5-羟基癸酸（5-HD）能降低P38MAPK、 iNOS和COX-2表达，同时取消IPC晚期保护效应；IPC和DZX预处理后给予5-HD不影响P38MAPK、iNOS 和COX-2表达，但也能取消IPC晚期保护效应。2．硝酸甘油预处理晚期心肌保护作用及机制：1-80ng/ml硝酸甘油<WP=10>预处理心肌细胞48h后，心肌细胞对后续致死性缺氧产生了抵抗力。SB203580和SMT皆能取消10ng/ml以下浓度，但不能取消20ng/ml以上浓度硝酸甘油预处理的心肌保护作用。NS398能取消4—40ng/ml硝酸甘油预处理的心肌保护作用。低浓度（10ng/ml）和高浓度（40ng/ml）硝酸甘油预处理后2h, 在心肌细胞中可检测到COX-2 mRNA，3h明显增高，24h降到预处理前水平。phospho-P38MAPK、iNOS和COX-2表达及变化与IPC后不同时间点的情况相似。低浓度硝酸甘油预处理时，SB203580、SMT、NS398和5-HD对P38MAPK、iNOS和COX-2表达及心肌保护作用的影响与IPC时类似。高浓度硝酸甘油预处理时，与低浓度硝酸甘油预处理不同, SB203580和SMT不能抑制COX-2的表达，预处理前给予5-HD，不能抑制COX-2表达，也能取消硝酸甘油预处理晚期保护作用。3．缺氧预处理成纤维细胞和心肌细胞对正常心肌细胞的保护作用：缺氧预处理后，心脏成纤维细胞对后续致死性缺氧没有产生抵抗力。缺氧预处理成纤维细胞孵育液预处理增加了心肌细胞对后续致死性缺氧的抵抗力；SB203580、SMT、NS398和5-HD对P38MAPK、iNOS和COX-2表达及保护作用的影响与IPC时类似。在硝酸甘油预处理成纤维细胞孵育液预处理后，正常心肌细胞对后续致死性缺氧没有产生抵抗力，缺氧预处理心肌细胞孵育液预处理后，则产生了抵抗力。结论：1. IPC后，大鼠心肌细胞中P38MAPK、iNOS和COX-2表达均明显增加；在机制和信号传导通路上，P38MAPK是iNOS的上游，iNOS是COX-2的上游，而线粒体K+ATP通道有双重作用：既是P38MAPK、iNOS和COX-2的上游触发<WP=11>子，又是IPC后期的效应子；它们皆参与了IPC晚期保护作用。2．低浓度和高浓度硝酸甘油预处理后不同时间，P38MAPK、iNOS和COX-2表达和变化情况与IPC时类似。在1-80ng/ml浓度范围内，硝酸甘油预处理对大鼠心肌细胞产生了保护作用。3．在低浓度硝酸甘油预处理晚期保护作用中，P38MAPK、iNOS、 COX-2和线粒体K+ATP通道皆是重要的一环，它们的相互关系与IPC时类似。高浓度硝酸甘油预处理时，COX-2和线粒体K+ATP通道是其中的重要因素，P38MAPK和iNOS可能也参与了部分作用。4．缺氧预处理成纤维细胞孵育液预处理对心肌细胞产生了保护作用，可能与成纤维细胞缺氧时产生“心肌保护物质”有关，心肌细胞中P38MAPK、iNOS、 COX-2和线粒体K+ATP通道的作用、相互关系与IPC时类似。缺氧预处理