AFL2基因的菊花遗传转化和AFL1基因的原核表达研究

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AFL1和AFL2基因是从苹果中克隆出来的LFY基因的同源基因,在苹果的成花过程中起关键作用,长约1.4kb,它们的碱基序列在编码区有90%的同源性。为了更深入地研究AFL基因的表达产物及其与开花的分子机理,本研究以这一对基因为材料,进行了原核表达和菊花转化的研究。第一部分:以菊花(Dendranthema morifolium)三个品种(JA:晚花大菊狮子头;JB:小早菊;JC:8月菊)的试管苗叶片为材料,研究了预培养方式、预培养时间、感染时间、感染条件、共培养时间以及几种常用抗生素对菊花再生的影响。为了筛选一种有效抑制农杆菌的抗生素,试验了4种抗生素对农杆菌生长的影响。结果表明,预培养两天、感染时间10分钟、共培养2天、抑菌培养8至10天,效果最好。硫酸卡那霉素浓度为5mg/L时能有效抑制植物体的再生;羧苄青霉素浓度在抑菌培养阶段和筛选阶段均为400mg/L时,既能有效地抑制菌体生长,又对菊花的再生影响不大。在已建立的菊花品种JC再生体系和优化的农杆菌介导的转化体系上进行的菊花遗传转化实验中,得到3株转化植株。虽然转化植株在发育早期均呈现出不同于非转化植株的一些表型,但在发育后期又恢复了非转化植株的表型。第二部分:在已经得到的AFL1基因克隆载体的基础上,经酶切,将AFL1基因克隆到原核表达载体pET28b中,获得重组表达质粒pETAFL1。将此重组表达载体质粒转化到大肠杆菌BL21,经培养、IPTG诱导表达,SDS-PAGE电泳,结果显示AFL1基因在大肠杆菌中成功表达,表达的AFL1融合蛋白分子量大约为53kD,与预计的蛋白质分子量相同,但只是蛋白表达水平较低。
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