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实验目的：观察舒络通脑颗粒对局灶性脑缺血损伤的干预作用，并初步探讨其干预作用机制,进一步在细胞水平上阐明舒络通脑颗粒有效成分氧化苦参碱的神经保护作用及机制，从而为舒络通脑颗粒防治脑缺血损伤的临床开发应用提供药理学实验依据。实验方法：本实验将150只健康成年雄性wistar大鼠随机分成六组：假手术组、模型组、血塞通分散片阳性药组(0.36g·kg-1)、舒络通脑颗粒低剂量组(1.35g·kg-1)、舒络通脑颗粒中剂量组(2.7g·kg-1)、舒络通脑颗粒高剂量组(5.4g·kg-1)，预灌胃给药5天后采用线栓法阻塞大脑中动脉制备局灶性脑缺血模型。术后24h进行相关指标测定。根据神经功能学评分和脑组织梗死面积计算方法观察局灶性脑缺血大鼠的神经功能恢复程度，通过HE染色方法检测大鼠脑组织的病理学改变，通过SOD活性及MDA含量变化等指标来评价舒络通脑颗粒预给药对局灶性脑缺血的影响，观察其对局灶性脑缺血损伤的干预作用。通过免疫组织化学方法和Westernblot方法检测舒络通脑颗粒对脑组织内质网应激标志蛋白GRP78表达的影响，采用免疫组化方法观察其对内质网应激凋亡关键蛋白CHOP和Caspase-12表达的影响，从而探讨舒络通脑颗粒对脑缺血损伤干预作用的可能机制。为进一步探讨舒络通脑颗粒的有效成分氧化苦参碱的神经保护作用及其机制，我们采用内质网应激体外诱导剂衣霉素刺激PC12细胞产生内质网应激，采用CCK-8法检测细胞存活力，从而确定衣霉素的工作浓度及氧化苦参碱的最适剂量。采用显微镜观察氧化苦参碱对神经细胞形态变化的影响，通过Western blot方法观察氧化苦参碱对GRP78表达的影响。实验结果：上述结果表明，舒络通脑颗粒能够降低局灶性脑缺血大鼠的神经功能学评分，缩小大鼠脑组织梗死面积，降低大鼠脑组织MDA含量及升高SOD活性，并改善局灶性脑缺血损伤造成的形态学改变。提示舒络通脑颗粒对局灶性脑缺血损伤具有干预作用。免疫组织化学和Western blot结果表明，舒络通脑颗粒能上调内质网应激GRP78蛋白的表达，下调内质网应激凋亡相关蛋白CHOP和Caspase-12的表达。提示舒络通脑颗粒对局灶性脑缺血损伤的干预作用机制可能与影响内质网应激有关。为了进一步观察舒络通脑颗粒有效成分氧化苦参碱的神经保护作用及其机制，在细胞水平上用20μM衣霉素诱导PC12细胞产生内质网应激，预先给予1mg·ml-1氧化苦参碱，24h后观察发现，氧化苦参碱能缓解细胞损伤程度，上调内质网应激标志蛋白GRP78的表达，提示氧化苦参碱可以通过影响内质网应激，提高GRP78表达保护神经细胞。实验结论：预防性给予舒络通脑颗粒可以有效干预大鼠局灶性脑缺血损伤，其干预机制可能与内质网应激有关，进一步研究发现舒络通脑颗粒的有效成分氧化苦参碱可通过影响内质网应激保护神经细胞。