rno-miR-122与rno-miR-182在对ACI大鼠移植性肝癌经动脉栓塞的相关功能性研究

来源 :复旦大学 | 被引量 : 2次 | 上传用户:qlin08
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目的探讨经动脉栓塞对ACI大鼠移植性肝癌中microRNA(miRNA)相对表达水平和潜在功能的影响,寻找与肝癌发生发展相关的miRNAs,并进行miRNAs相关功能研究,为寻找评估疗效及生存预后的生物标志物提供线索。材料与方法30只ACI大鼠随机为A、B两组,每组15只。30只ACI大鼠均被行肝癌移植。A组动物在肝癌移植14d后予经动脉栓塞,B组未行经动脉栓塞。A组在TAE术前以及术后7d,测量肿瘤表面最大长径(a)和垂直短径(b),计算体积。B组则在肿瘤移植14d后测量肿瘤表面最大长径(a)和垂直短径(b),计算体积。在AE 7d后采集A组的肝癌组织和癌旁组织。B组在肝癌移植14d后采集的肝癌组织和癌旁组织。采取的标本用TRIzol法抽提总RNA后利用Illumina Solexa平台行高通量深度测序,对测序结果进行分析,表达差异显著者作为候选miRNA。利用Taqman qRT-PCR方法验证其在各对组织样本中的相对表达水平;利用生物信息学软件预测备选miRNA的靶基因。再利用分子克隆技术构建表达载体,转入HEK 293T细胞中以获得目的基因的表达,并用双荧光检测。结果30只大鼠肝癌均移植成功。A组TAE前与B组的肿瘤体积无统计学显著性差异(A组体积0.474±40.181cm3,B组体积0.517±0.197cm3,P=0.211),其中A组TAE前与TAE术后7d的肿瘤体积存在统计学显著性差异(A组术前体积0.474±0.181cm3,A组术后体积0.329±0.140 cm3,P=0.001),肿瘤体积明显缩小。rno-miR-122在组织样本中相对表达水平的低通量qRT-PCR验证结果显示,rno-miR-122在未接受经动脉栓塞的癌组织中相对低表达(P=1.3e-10),在接受经动脉栓塞并且缩小的癌组织中表达较术前上调(P=0.03),与高通量的测序结果一致;利用大量的生物信息学模型计算,我们分析预测并得到rno-miR-182所作用的潜在靶基因cebpa及其与rno-miR-122间的信号通路,并在大鼠肝癌和癌旁组织中的得到表达验证。通过对HEK 293T细胞进行转染及双荧光报告基因检测,进一步证实了Cebpa是miR-182的直接靶基因。结论经动脉栓塞能够使大鼠肝癌肿瘤体积缩小,rno-miR-122在肝癌的发生发展过程中起着抑癌的作用,TAE后rno-miR-122表达上升。本研究结果表明,在肝癌中miR-182高表达进而对Cebpa抑制,而Cebpa的抑制进一步抑制miR-122的表达,激活整个通路,导致癌细胞增殖。该通路可能是治疗的潜在作用位点,亦可能是潜在用来进行疗效和生存预后评估的生物标志物。
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