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第一部分人乳腺上皮细胞的分离培养和条件培养基的制备目的分离和培养人肥大乳房乳腺上皮细胞,制备分别来自人肥大乳房乳腺上皮细胞和正常乳腺上皮细胞的条件培养基。方法采用胶原酶消化法从人肥大乳房的乳腺组织中分离乳腺上皮细胞,并传代培养至第3代；复苏冻存的人正常乳腺上皮细胞株(HBL-100),并进行培养。MTT法绘制两种细胞的生长曲线,比较其增殖能力的差别。收集两种乳腺上皮细胞的上清液,制备条件培养基。对条件培养基进行质量检测。结果分离和培养的人肥大乳房乳腺上皮细胞,以及复苏的正常乳腺上皮细胞株(HBL-100)生长状况良好,为典型的上皮细胞形态。MTT法显示两种细胞的光密度值(OD值)差异有统计学意义(P<0.05)。制备的条件培养基外观清亮、无菌、PH值7.35±0.06、葡萄糖浓度为100mg/dl。结论同样培养条件下,HBL-100较肥大乳房乳腺上皮细胞的增殖能力强。成功制备来自于乳腺上皮细胞的符合细胞培养基本要求的条件培养基。第二部分不同条件培养基对人脂肪干细胞增殖能力的影响目的观察两种条件培养基对人脂肪干细胞生长和增殖能力的影响,为下一步诱导脂肪干细胞定向分化筛选合适的条件培养基。方法体外分离和培养人脂肪干细胞,采用流式细胞仪检测细胞表面标记物CD13、CD29、CD44、CD45、CD90和CD105的表达,并体外诱导脂肪干细胞向脂肪细胞和软骨细胞分化。用不同条件培养基培养脂肪干细胞,MTT法绘制细胞的生长曲线,比较不同条件培养基对脂肪干细胞增殖能力的差别。结果体外分离和培养的人脂肪干细胞生长状况良好,呈典型的成纤维细胞形态。流式细胞仪检测结果显示CD13、CD29、CD44、CD90和CD105阳性表达,而不表达CD45,经成脂和成软骨定向诱导,细胞分别出现脂肪细胞和软骨细胞的表型特征。脂肪干细胞经人肥大乳房乳腺上皮细胞和HBL-100的条件培养基培养后,分别出现细胞数目减少和增殖旺盛的现象。结论来自于人肥大乳房乳腺上皮的条件培养基不能促进脂肪干细胞的正常生长和增殖。而来自于人正常乳腺上皮细胞株(HBL-100)的条件培养基可促进细胞的正常增殖,适合于用作脂肪干细胞的培养液。第三部分条件培养基诱导人脂肪干细胞向乳腺上皮细胞分化的实验研究目的探讨条件培养基诱导人脂肪干细胞(ADSCs)向乳腺上皮细胞定向分化的可行性。方法实验组和对照组分别采用条件培养基和DMEM/F12+10%FBS培养脂肪干细胞,培养16天,Western blot检测细胞表面标志物卵透明带蛋白1(zona occludens protein1,Z01)和细胞角蛋白18(cytokeratin18, CK18)的表达。诱导分化后的细胞在体外进行三维培养16天,免疫荧光细胞染色法检测细胞Ⅳ型胶原的表达,QRT-PCR检测细胞α-酪蛋白(α-casein) mRNA表达。结果培养后14天,实验组诱导后的细胞形态转变为上皮样的圆形,Western blot检测上皮细胞抗原标志物ZO1和CK18表达增加,与对照组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。诱导分化后的细胞体外三维培养16天后,细胞形成清晰的立体状团块样结构,类似于体内正常的腺泡和导管结构。免疫荧光细胞染色法检测细胞Ⅳ型胶原呈阳性表达,QRT-PCR检测实验组细胞α-casein mRNA表达水平上调。结论使用来自人正常乳腺上皮细胞株(HBL-100)的条件培养基可成功诱导人脂肪干细胞向乳腺上皮细胞分化。