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目的:观察具栖冬青苷对葡聚糖硫酸钠(DSS)所致小鼠溃疡性结肠炎的保护作用,并探讨其抗炎机制。
方法:(1)在动物实验中,将8周龄左右的C57BL/6雄性小鼠随机分为6组:对照组、30mg/kg PE组、DSS组、DSS+5mg/kg PE组、DSS+15mg/kg PE组、DSS+30mg/kg PE组。每组5只。对照组和PE组给予正常纯水,其余各组给予2% DSS(DSS用纯水稀释)。对照组和 DSS组每日用灌胃器灌以纯水,其余各组每日灌胃相应浓度的 PE(PE用纯水稀释),2ml/次/天。在第8天,收集小鼠的结肠组织并放于-80℃冰箱冷藏备用。用H&E染色法检测具栖冬青苷对小鼠结肠组织的保护作用, MPO法检测炎性因子的释放。(2)在细胞实验中,我们选取RAW264.7细胞和小鼠原代腹腔巨噬细胞。将其分为6组:对照组、100μmol/ml PE组、LPS组、LPS+25μmol/ml PE组、LPS+50μmol/ml PE组、LPS+100μmol/ml PE组。待细胞生长良好后,先用PE处理细胞1h,再用LPS刺激4h。采用qRT-PCR法检测具栖冬青苷在基因水平上对炎症因子释放的影响。Western blot法检测具栖冬青苷在蛋白水平上对AKT、MAPK和NF-κB信号通路的影响。免疫荧光法检测具栖冬青苷对核转录因子P65的影响。(3)最后用GraphPad prism软件对数据进行分析。
结果:(1)动物试验结果表明,具栖冬青苷能明显减轻 DSS对小鼠结肠组织的损伤和炎症因子的释放。(2)细胞实验结果表明,具栖冬青苷能显著抑制 AKT、MAPK和 NF-κB信号通路的激活,从而以剂量依赖的方式显著抑制炎症因子的释放。在免疫荧光的实验中可以清楚地看到具栖冬青苷可以显著的抑制核转录因子 P65的入核。
结论:具栖冬青苷可通过以剂量依赖的方式抑制 AKT、 MAPK和 NF-κB信号通路的激活,减少炎症因子的释放,从而保护 DSS对小鼠结肠组织的病理损坏。
方法:(1)在动物实验中,将8周龄左右的C57BL/6雄性小鼠随机分为6组:对照组、30mg/kg PE组、DSS组、DSS+5mg/kg PE组、DSS+15mg/kg PE组、DSS+30mg/kg PE组。每组5只。对照组和PE组给予正常纯水,其余各组给予2% DSS(DSS用纯水稀释)。对照组和 DSS组每日用灌胃器灌以纯水,其余各组每日灌胃相应浓度的 PE(PE用纯水稀释),2ml/次/天。在第8天,收集小鼠的结肠组织并放于-80℃冰箱冷藏备用。用H&E染色法检测具栖冬青苷对小鼠结肠组织的保护作用, MPO法检测炎性因子的释放。(2)在细胞实验中,我们选取RAW264.7细胞和小鼠原代腹腔巨噬细胞。将其分为6组:对照组、100μmol/ml PE组、LPS组、LPS+25μmol/ml PE组、LPS+50μmol/ml PE组、LPS+100μmol/ml PE组。待细胞生长良好后,先用PE处理细胞1h,再用LPS刺激4h。采用qRT-PCR法检测具栖冬青苷在基因水平上对炎症因子释放的影响。Western blot法检测具栖冬青苷在蛋白水平上对AKT、MAPK和NF-κB信号通路的影响。免疫荧光法检测具栖冬青苷对核转录因子P65的影响。(3)最后用GraphPad prism软件对数据进行分析。
结果:(1)动物试验结果表明,具栖冬青苷能明显减轻 DSS对小鼠结肠组织的损伤和炎症因子的释放。(2)细胞实验结果表明,具栖冬青苷能显著抑制 AKT、MAPK和 NF-κB信号通路的激活,从而以剂量依赖的方式显著抑制炎症因子的释放。在免疫荧光的实验中可以清楚地看到具栖冬青苷可以显著的抑制核转录因子 P65的入核。
结论:具栖冬青苷可通过以剂量依赖的方式抑制 AKT、 MAPK和 NF-κB信号通路的激活,减少炎症因子的释放,从而保护 DSS对小鼠结肠组织的病理损坏。