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目的：
采用腺病毒作为载体，应用RNAi技术抑制AFP基因的表达，观察其在AFP阳性胃癌FU97中对甲胎蛋白基因的沉默作用，并研究抑制甲胎蛋白基因后对此肿瘤细胞周期及凋亡的影响，由此我们可以研究甲胎蛋白在AFP相关肿瘤发生发展中的作用，并探讨其在AFP相关肿瘤的基因治疗方面潜在的应用价值。
方法：
(1)选择符合条件的AFP特异性RNA干涉靶序列，体外合成两段互补的寡核苷酸，与线性化的载体pDC316-EGFP-U6质粒连接；
(2)构建好的穿梭质粒pDC316-EGFP-U6-AFP-siRNA和腺病毒骨架质粒pBHGlox_El，3Cre共转染HEK293细胞，同源重组产生重组腺病毒；
(3)成功包装腺病毒Ad-EGFP-U6-AFP-siRNA载体后，转染入FU97细胞，筛选出最佳感染复数；
(4)腺病毒干扰载体转染入细胞后，通过RT-PCR、免疫发光、流式细胞技术和WesternBlotting观察对AFP在mRNA和蛋白水平的抑制作用；
(5)流式细胞术检测对FU97细胞周期及凋亡的影响。
结果：
(1)构建的穿梭质粒载体经PCR鉴定和测序分析，证实与设计一致；
(2)重组腺病毒Ad-EGFP-U6-AFP-siRNA经PCR检测和EGFP表达证实构建成功，并测滴度为6.8×109IU/ml；
(3)筛选出最佳感染复数为：MOI=100;
(4)RT-PCR、免疫发光和WesternBlotting发现Ad-EGFP-U6-AFP-siRNA转染细胞后能显著抑制AFP基因在mRNA和蛋白水平的表达；
(5)流式细胞术周期分析显示G0-G1期细胞百分率(33.49±1.85％)明显低于空载体对照组和空白对照组(64.76±2.98％和74.81±2.60％，P＜0.01)，G2-S期(64.10±2.59％)显著高于空载体组和空白对照组(34.77±1.91％和29.85±2.85％，P＜0.01)；凋亡分析，实验组与各对照组之间凋亡发生无显著差异(P＞0.05)。
结论：
重组腺病毒介导的RNA干扰能够显著抑制AFP在FU97中mRNA水平和蛋白水平的表达；抑制AFP后，影响细胞增殖周期，但对细胞凋亡无影响。