马尾松花粉多糖的分离纯化、结构表征及其活性研究

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本文以马尾松花粉为原料,对其中的花粉活性多糖的提取工艺进行研究,采用DEAE-Sephadex A-25柱层析、Sephadex G-75凝胶柱层析对花粉粗多糖进行了分离和纯化;运用红外光谱分析、紫外扫描分析、气相色谱、气相-质谱联用分析等方法对花粉多糖的结构进行了初步研究;通过体外模拟实验和MTT法研究松花粉多糖对活性氧自由基的清除效果及对三种肿瘤细胞株Sp2/0、HepG2、Hela生长的影响。主要研究结果如下:1.马尾松花粉多糖提取工艺的研究研究了马尾松花粉破壁方法、温度、料液比、提取时间、浸提次数等因素对松花粉多糖提取效果的影响,通过正交实验确定了最佳提取工艺参数。结果表明:超微粉碎破壁方法最好;提取时间为2 h,提取温度为85℃,料水比为1:15,浸提次数为4次,为最佳提取工艺参数,花粉多糖得率为1.70%。2.马尾松花粉多糖的分离及纯化研究采用DEAE-SephadexA-25层析法对花粉粗多糖进行了初步分离,采用Sephadex G-75凝胶柱层析对花粉多糖进一步分级。结果表明:花粉粗多糖以95%乙醇沉淀后上DEAE-Sephadex A-25层析柱,得到四个级分,分别为MTP1、MTP2、MTP3、MTP4,透析后,浓缩冻干处理得淡黄色粉末,得率分别为27.18%、7.03%、9.22%、19.60%;取MTP1,MTP4经Sephadex G-75凝胶柱分级,分别得精制花粉多糖MTP1-A、MTP4-A,得率分别为33.0%和26.0%。3.MTP1-A、MTP4-A的结构初步分析采用红外光谱分析、紫外扫描分析、气相色谱、气相-质谱联用分析等方法对花粉多糖的结构进行了初步研究。结果表明:MTP1-A由甘露糖、葡萄糖、阿拉伯糖组成,各单糖组成摩尔比为1:0.43:0.33;MTP4-A由葡萄糖、阿拉伯糖、鼠李糖、甘露糖组成,各单糖摩尔比为1:0.30:0.14:0.11。气-质分析表明MTP1-A、MTP4-A均存在呋喃和吡喃环,紫外扫描分析显示不含糖蛋白,I2-KI反应表明含有较长的侧链和较多的分支,β-消去反应表明存在O-糖苷键。4.马尾松花粉多糖体外抗氧化及抗肿瘤活性研究通过体外模拟实验,研究不同种类的松花粉多糖对活性氧自由基的清除效果,采用MTT法检测了花粉多糖对三种肿瘤细胞株Sp2/0,HepG2,Hela生长的影响。结果表明,不同种类的花粉多糖对超氧阴离子和羟基自由基有一定的量效关系,但是这种量效效应表现的不明显;对DPPH自由基的清除实验表现出较好的活性,且MTP、MTP1-A、MTP4-A的清除率呈现出较好的剂量效应;MTP1、MTP2、MTP3、MTP4对三种肿瘤细胞株Sp2/0、HepG2、Hela的生长均有抑制作用,在实验浓度范围内呈一定的剂量和时间效应。
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