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目的通过体外研究吉非替尼对人胰腺癌细胞生长抑制与PI3K/Akt通路之间的关系，讨论EGFR通路（EGFR、pEGFR）及PI3K/Akt通路（Akt、pAkt）对吉非替尼疗效是否有预测价值，为临床筛选对吉非替尼敏感的胰腺癌患者提供体外实验的理论参考。体外培养对吉非替尼具有不同敏感性的人胰腺癌细胞株，使用药物抑制PI3K/Akt通路的活化，分析不同细胞株在吉非替尼和PI3K/Akt抑制剂作用下生长抑制率的变化规律，探讨吉非替尼可能的耐药机制，探讨pAkt能否作为判断吉非替尼疗效及逆转耐药的治疗靶点，为PI3K/Akt抑制剂与吉非替尼联合应用逆转吉非替尼耐药提供理论依据，并为吉非替尼耐药人群后续治疗的选择提供参考。方法选取3株突变状态不同的人胰腺癌细胞株：BxPc-3、MiaPaCa-2及PANC-1，采用Sanger测序法检测EGFR、Kras突变。MTT法测定吉非替尼和LY294002对细胞的生长抑制曲线，比较分析不同细胞株对吉非替尼及LY294002的敏感性，以及不同LY294002浓度时各细胞株对吉非替尼敏感性的变化情况。对3株人胰腺癌细胞分别按照空白对照组、单药吉非替尼5μM组、单药LY29400210μM组、LY29400210μM联合吉非替尼5μM组进行处理，Western Blot免疫印迹法测定各组细胞EGFR、pEGFR、Akt、pAkt的蛋白表达量，分析各组药物对人胰腺癌细胞EGFR、Akt蛋白活化的影响的影响。结果1. DNA测序结果显示BxPc-3细胞EGFR/Kras均为野生型；MiaPaCa-2细胞EGFR野生型，Kras G12C突变；PANC-1细胞EGFR T790M突变，Kras G12D突变。2. MTT检测显示吉非替尼和LY294002对人胰腺癌细胞系BxPc-3、MiaPaCa-2及PANC-1均表现出抑制细胞生长作用，随着药物浓度的增加，其对细胞生长的抑制作用逐渐增强，各组用药剂量与细胞生存率之间呈负相关（p<0.05）。LY294002与吉非替尼联合，可以增强吉非替尼对人胰腺癌细胞的抑制作用，LY294002剂量越大，增强作用越明显。BxPc-3、MiaPaCa-2及PANC-1细胞的LY294002IC50分别为（24.65±1.87）μM、（17.04±0.78）μM和（11.32±1.48）μM，差异有统计学意义（F=191.79，P<0.01）；单药吉非替尼IC50分别为（6.34±1.68）μM、（15.41±2.69）μM及（36.67±1.39）μM，差异有统计学意义（F=545.74，P<0.01）；LY2940022μM联合吉非替尼IC50分别为（3.48±1.75）μM、（5.39±1.87）μM及（11.55±2.49）μM，差异有统计学意义（F=37.64，P<0.01）；LY29400210μM联合吉非替尼IC50分别为*（0.66±0.19）μM、*（0.69±0.07）μM及（2.33±0.49）μM，差异有统计学意义（F=87.82，P<0.01，*组间差异无统计学意义，P>0.05）。3. Western Blot检测显示在空白对照组中，吉非替尼敏感细胞系BxPc-3的EGFR表达量（1.11±0.21）、活化量（0.81±0.11）及相对活性（0.73±0.05）最高，Akt表达量（0.53±0.07）、活化量（0.09±0.11）及相对活性（0.17±0.12）最低；而吉非替尼高度耐药细胞系PANC-1的EGFR表达量（0.61±0.06）、活化量（0.38±0.04）及相对活性（0.62±0.07）最低，Akt表达量（1.51±0.18）、活化量（1.54±0.16）及相对活性（1.02±0.21）最高。经过吉非替尼单药处理后，3株细胞系的EGFR及AKT表达量并无明显变化，但活化量及相对活性均有下降，敏感株BxPc-3的EGFR相对活性（0.36±0.05）下降51.22%，Akt相对活性（0.04±0.03）下降76.91%；高度耐药株PANC-1的EGFR相对活性（0.61±0.09）仅下降2.05%，Akt相对活性（0.56±0.10）下降44.96%。LY294002对3株细胞pAkt及pEGFR均有明显抑制作用，并且在与吉非替尼联合应用时，可以显著增强吉非替尼对胰腺癌细胞EGFR和Akt磷酸化的抑制作用，敏感株BxPc-3的EGFR相对活性（0.02±0.04）下降97.51%，Akt相对活性（0.02±0.02）下降87.98%；高度耐药株PANC-1的EGFR相对活性（0.11±0.04）下降82.71%，Akt相对活性（0.08±0.05）下降93.42%。结论吉非替尼通过阻断EGFR活化，对人胰腺癌细胞系BxPc-3、MiaPaCa-2及PANC-1的生长有抑制作用，PI3K/Akt通路的活化与人胰腺癌细胞对吉非替尼的反应性相关。pAkt高表达的人胰腺癌细胞可能对吉非替尼耐药。联合应用PI3K抑制剂LY294002可以通过阻断PI3K/Akt通路，抑制pAkt活性，增强细胞对吉非替尼的敏感性，进而逆转pAkt高表达人胰腺癌细胞对吉非替尼的耐药性。