研究背景和目的乳腺癌是一种常见的、严重威胁人类生命健康的恶性肿瘤。近些年来，随着我国人口老龄化、农村城市化和城镇工业化的进程、人们生活环境污染与破坏、人们生活饮食习惯等生活方式的改变，其发其发病率和死亡率逐年上升，目前在我国城市中居女性恶性肿瘤的首位。转移是影响乳腺癌患者治疗效果和死亡的主要原因。因此探讨与乳腺癌转移相关的因素，阐明乳腺癌转移机制，寻找预防和治疗的有效途径，寻找新的早期诊断和治疗靶点，提高治疗效果是目前乳腺癌研究的重点内容之一。IRF2基因定位于染色体4q34.1-q35.1，表达无组织特异性，在肿瘤调节过程中IRF2具有与IRFl相反的作用，由于IRF1与IRF2的识别位点相同，IRF2可通过竞争结合相同的识别位点而抑制IRFl的转录。过表达IRF2的NIH3T3细胞能使裸鼠致瘤，而过表达IRF2的同时表达IRFl则将消除NIH3T3细胞的致瘤能力。Keller等研究发现IRF2能与Blimpl（B-lymphocyte-inducedmaturation protein1）共同结合于IFN-8基因VRE的PRDI结构域，Blimpl具有促分化抑制增殖作用，而IRF2能抑制Blimpl的作用而引起细胞癌变。在增殖细胞中，IRF2乙酰化后可结合到组蛋白H4的启动子，引起细胞持续增殖。N-ras是细胞生长抑制因子，在骨髓细胞系过表达IRF2可以逆转N-ras诱导的生长抑制。IRF2可通过干扰IRFl与ISRE的结合削弱干扰素的作用，从而促进细胞增殖和癌变。本研究在临床样本中分别从核酸和蛋白水平，探讨IRF2对乳腺癌增殖转移的影响。方法1、乳腺癌组织和细胞中IRF2的表达。首先采用Western blot和RT-PCR技术从蛋白和核酸水平检测IRF2在几种常见的乳腺癌细胞株及临床组织病理标本中的表达情况，初步探讨IRF2与乳腺癌细胞的关系。2、乳腺癌临床组织标本中IRF2的表达检测及其临床意义分析。通过回顾性分析180例乳腺癌组织样本的随访信息和临床病理资料，应用免疫组化技术检测IRF2蛋白的表达情况。分析IRF2蛋白表达与乳腺癌患者生存期的关系，为预后判定提供依据。3、IRF2表达沉默对乳腺癌细胞生物学行为的影响。利用在线数据库和设计软件设计两个个IRF2干扰片段，构建慢病毒载体，将慢病毒载体质粒与辅助质粒共转染包装慢病毒。用含IRF2特异性干扰片段的慢病毒感染MDA-MB-231细胞，以含无关序列载体的病毒为阴性对照。筛选抗性单克隆，RT-PCR和Western blot检测各干扰克隆细胞中IRF2基因干扰效率，以干扰效率最高的克隆为下一步实验的研究对象。利用MTT比色法、平板克隆形成实验及流式细胞仪检测IRF2沉默后对细胞体外增殖的影响；利用划痕实验、体外侵袭小室（boyden小室）进行体外侵袭实验，检测IRF2沉默后对乳腺癌侵袭能力的影响。结果1、乳腺癌组织和细胞中IRF2的表达。RT-PCR方法在核酸水平的检测结果表明相对于正常对照，IRF2基因在几种乳腺癌细胞中的表达水平明显增高；IRF2在20例乳腺癌组织样本中的表达水平也均明显高于其对照配对正常乳腺组织。并且在乳腺癌中IRF2基因表达水平的增高与乳腺癌的病理类型无关，提示在乳腺癌细胞中存在IRF2基因的普遍表达。而Western blot方法对正常乳腺和乳腺癌细胞和组织中IRF2蛋白的表达检测结果与核酸水平的检测结果基本一致。2、乳腺癌组织和细胞中IRF2蛋白的表达及临床意义。通过免疫组化检测结果显示为“浆阳”，即IRF2蛋白主要表达在乳腺癌组织细胞中的胞浆。在180例乳腺癌组织中，IRF2的阳性率为54.44%（98/180）；在100例正常乳腺组织中IRF2阳性率为33.00%（33/100）。IRF2蛋白在不同病理类型的乳腺癌细胞中的表达无显著性差异（P>0.05）；相对于正常对照乳腺组织，IRF2蛋白在乳腺癌组织中表达的阳性率明显增高，差异具有统计学意义（P<0.05）。IRF2蛋白的表达与患者临床分期和有否淋巴转移密切相关（P<0.05）；而IRF2的表达水平和病理类型、肿瘤的大小及患者的性别、年龄无明显相关性（P>0.05），结果表明在乳腺癌组织中IRF2蛋白高水平表达，并与淋巴转移相关。3、IRF2表达沉默对乳腺癌细胞生物学特性的影响。利用RNAi技术建立IRF2基因沉默的稳定乳腺癌细胞株。构建了两个IRF2的慢病毒干扰载体，并包装慢病毒后，含有干扰载体的慢病毒感染MDA-MB-231细胞，杀稻瘟菌素筛选抗性克隆，约14天后，挑取建立抗性单克隆，利用RT-PCR和Western blot技术检测各克隆的IRF2的表达情况，筛选干扰效率最高的克隆为下一步实验的研究对象。MTT比色法观察IRF2基因表达沉默后体外细胞的增殖情况，与MDA-MB-231/mock细胞相比，MDA-MB-231/IRF2细胞的增殖速度明显减慢，并且呈时间依赖关系（P<0.05）。平板克隆形成实验显示MDA-MB-231/IRF2细胞的活力显著下降（P<0.05）。利用流式细胞仪检测各组细胞的细胞周期，结果显示MDA-MB-231/IRF2细胞S期比率增加，表明IRF2表达沉默后细胞增殖减慢。分析结果表明IRF2表达水平减低后，肿瘤细胞体外生长显著减慢。利用划痕实验检测IRF2基因表达沉默后细胞运动能力的改变，实验结果显示，随着细胞培养时间延长，不同时间迁移细胞数有着明显差异（P<0.05）；MDA-MB-231/IRF2细胞迁移数明显低于MDA-MB-231和MDA-MB-231/mock，差异具有统计学意义。结果表明IRF2沉默后MDA-MB-231细胞的运动迁移能力减慢。利用体外侵袭小室实验检测IRF2基因表达沉默后细胞侵袭能力的变化，实验结果发现，MDA-MB-231/mock细胞相比，MDA-MB-231/IRF2细胞的侵袭能力明显减低（P<0.05），说明IRF2表达沉默降低了乳腺癌细胞的体外侵袭能力。结论1、慢病毒干扰载体可以有效地下调IRF2的表达，降低乳腺癌细胞体外侵袭、增殖及转移的能力；IRF2是乳腺癌侵袭和转移过程中的重要调控因子。2、IRF2的表达与乳腺癌患者的预后相关，可能为影响乳腺癌患者生存的独立预后因素。