实时定量PCR(RT-qPCR,Real-time quantitative PCR)是一项研究基因表达的强有力技术,其凭借自身的多种优势,被广泛地用于分析基因表达量的变化。但是,要想得到准确的qPCR结果,往往需要选用相对稳定的内参基因进行目标基因的校正和标准化。大量的研究表明,适用于所有样品和条件的理想内参基因并不存在,选取不合适的内参基因进行标准化,可能会导致不正确的定量结果,并做出错误的结论。前列腺癌(PCa,Prostate cancer)是男性生殖系统非常常见的恶性肿瘤,也是西方国家中第二大癌症相关的死亡因素。研究表明,雄激素对前列腺癌的影响巨大,其通过雄激素受体(AR,Androgen receptor)调控包括mRNA和miRNA在内的大量基因的表达,这些基因中甚至包括一些内参基因。因此,寻找到可用于前列腺癌治疗靶点的雄激素调节基因,对了解前列腺癌的发展和进程有非常重要的意义。前列腺癌细胞是开展这些研究很好的体外模型,然而,目前还没有关于雄激素处理前列腺癌细胞系最适内参基因筛选的研究。本研究中,我们以五种前列腺癌细胞系为研究对象,使用不同浓度的双氢睾酮(DHT,Dihydrotestosterone)雄激素进行处理,评估了 10 种 mRNA(18S rRA、ACTB、ALAS1、GAPDH、HPRT1、K-ALPHA-1、RPL13A、SDHA、TBP 和 YWHAZ)和 6 种 npcRNA(miR-16、miR-130b、miR-1225-3p、miR-1228-3p、RNU6-2 和 RNU43)内参基因的稳定性。首先,我们通过Western blot实验验证了 DHT处理对测试样品的影响;然后,通过geNorm、Bestkeeper和NormFinder三种算法对内参基因的稳定性进行分析,并最终得到一个推荐的综合排名。结果显示:在所有前列腺癌细胞系中,TBP/ACTB和miR-16/miR-1228-3p分别是用于mRNA和miRNA分析的最适内参基因组合。当考虑到前列腺癌细胞类型时:在AR+细胞中,YWHAZ/ACTB和miR-16/miR-1228-3p分别是用于mRNA和miRNA分析的最适内参基因组合;在AR-细胞中,TBP/GAPDH和RNU43/RNU6-2分别是用于mRNA和miRNA分析的最适内参基因组合。此外,当使用不同稳定性的内参基因对目标基因PCA3和miR-141进行标准化时,目标基因的表达量因所用内参基因的不同而表现出较大的差异。这提示我们,在使用RT-qPCR技术的基因表达研究中,选用适合的内参基因进行校正和标准化的重要性。本研究是在前列腺癌细胞系中,使用不同浓度的DHT处理下,对内参基因的稳定性进行的首次评估。本研究有助于在前列腺癌细胞系中发现更加准确可靠的雄激素调节基因。