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培育优质早熟和大粒、无核葡萄品种是当今世界各国鲜食葡萄育种的重要目标之一,利用胚挽救技术能有效地提高早熟和无核葡萄育种效率,而成为葡萄育种中基因重组的有力桥梁,这对加快鲜食葡萄育种进程具有重要意义。 本实验以不同的早熟葡萄品种、无核葡萄品种为母本与具有优良性状(大粒、耐贮运性强)的晚熟葡萄品种为父本进行杂交,以及二倍体与四倍体葡萄品种间进行杂交,在适宜时期取其胚珠进行胚挽救培养。结果表明,每个杂交组合浆果内胚珠的平均发育数随浆果的发育而减少,即胚珠的败育随之增加。不同杂交组合胚珠败育的态势有明显的差异。大部分杂交胚珠在授粉后20d以后开始败育,在45d后呈急剧败育趋势。所以,在授粉后35d-45d进行杂交胚挽救培养是可行的。 以NN-1969培养基作为葡萄胚挽救培养的基本培养基效果较好,胚珠产生愈伤组织少且比率低,在24%以下,胚珠正常发育率均在90%以上,可能低浓度的无机盐比高浓度的无机盐更有利于离体幼胚的生长发育。在NN-1969+IAA1.75mg.L1+GA30.35mg.L-1培养基上,杂交胚萌发率最高达52.08%,子叶鲜绿,萌发正常,将萌发胚转到成苗培养基(1/2MS)上,成苗率最高达35.42%,幼苗生长健壮。凤凰51×红提的杂交胚,在该培养基上首次诱导出2个白化苗株系,占整个成苗的13.33%,其中一个株系能继代繁殖。此外,桑姆无核X红提杂交胚在NN-1969+2,4-D0.05mg.L-1+6-BA1.0mg.L-1培养基上萌发后,转到成苗培养基上培养时,有14.28%的萌发胚在其子叶和下胚轴之间的区域产生白色、丛生、卵状的胚状体,且能产生次生胚状体。这些胚状体在成苗培养基(1/2MS)上易成苗。大多数杂交组合的胚珠在授粉后45d时接种,胚挽救效果较好。 低的蔗糖浓度有利于幼胚的萌发,随着蔗糖浓度的增加,萌发率有降低的趋势。适宜葡萄杂交胚挽救的蔗糖浓度为30mg.L-1,在此蔗糖浓度下,桑姆无核×红提和京秀×选拔巨峰杂交胚的萌发率和成苗率较高,分别达39.28%、35.71%、19.23%、7.69%,且有较少的畸形萌发现象。 葡萄珠被对胚的萌发存在着机械阻碍作用,胚珠经切割能有效地提高杂交胚萌发率和成苗率,藤稔×京秀杂交组合的胚珠以切喙+横切半培养,胚萌发率和成苗率比以完整胚珠培养的分别提高了15.74%、15.91%。 在胚挽救培养基中加入适宜浓度的活性炭能有效地减轻胚珠和培养基的褐化,促进 杂交胚的萌发和成苗。培养基中加入Zg.L“’活性炭的胚挽救培养效果好,京秀X藤检和 乍那X黑大粒杂交胚萌发率和成苗率分别达13.33O、6.67%、66.67O、33.33o。 京秀X藤能杂交组合的胚珠(授粉后 45d取材)经低温(4’C)处理 60d,对杂交 胚的萌发成苗有较好的促进作用,其萌发率和成苗率比对照高出7%左右。此外,用 10thg.L‘2,4D处理选拔巨峰 X京秀杂交果穗,能明显提高杂交胚的萌发率和成苗率。 经鉴定,二倍体葡萄品种间杂交后代试管苗的根尖染色体数均为38条,不同杂交 组合胚挽救苗移栽到营养袋中的生长势和叶片形态出现了较大的分离;在二倍体与四倍. 体葡萄品种杂交胚挽救中,有6个组合获得幼茵,共25个株系,其中1个株系经鉴定 是三倍体,三倍体幼苗多数根尖细胞染色体数为57条,该营养袋茵生长健壮,叶片大, 幼叶浅紫红色,茸毛稀,三裂,上下裂刻浅,叶柄洼呈近矢形,叶缘锯齿大且钝。