论文部分内容阅读
目的:本研究对前列腺癌激素非依赖性细胞进行药物干预及信号通路相关的实验,观察姜黄素对前列腺癌激素非依赖性细胞的作用,并探讨及联合给药的的作用机制。方法:1.采用MTT法检测细胞的抑制作用,对PC3、DU145、LNCaP细胞进行姜黄素单药药敏、姜黄素联合比卡鲁胺协同作用的试验观察其抑制效果。2.用姜黄素不同浓度以及在不同的时间点处理细胞,用Western blot法观察MAPK信号通路中SAPK/JNK、ERK1/2蛋白磷酸化的改变情况,同时检测目的蛋白MUC1-C、P65蛋白的表达情况。用姜黄素最佳的处理浓度单独及联合比卡鲁胺处理PC3、DU145细胞,用Western blot法观察SAPK/JNK、ERK1/2激酶蛋白分子的磷酸化改变情况以及目的蛋白MUC1-C、P65的表达情况。结果:1.MTT增殖抑制试验结果(1)姜黄素单独使用对激素依赖性细胞和激素非依赖性细胞都具有抑制作用。并呈现一定的时间依赖性和剂量依赖性。(2)姜黄素联合比卡鲁胺对激素依赖性细胞和激素非依赖性细胞的作用,对于单用比卡鲁胺而言,两者联用具有更强的抑制作用。2.姜黄素干预PC3、DU145细胞剂量依赖及时间依赖结果(1)姜黄素对PC3、DU145细胞进行干预的剂量依赖性实验中,MUC1-C、P65蛋白成剂量依赖的下降趋势,说明姜黄素对PC3细胞这两蛋白具有调节作用,且不同剂量之间的差异具有统计学意义(P<0.05)。(2)姜黄素对PC3、DU145细胞时间依赖性实验中,p-SAPK/JNK及p-ERK1/2显示较好的时间相关性,在不同的点之间与空白组分析,差异具有统计学意义(P<0.05)。3.姜黄素联合比卡鲁胺对激素非依赖性PC3、DU145细胞干预目的蛋白和蛋白激酶的变化(1)姜黄素对PC3细胞的p-SAPK/JNK及p-ERK1/2的灰度值分别为1.41±0.21,1.31±0.38,比卡鲁胺对PC3细胞的p-SAPK/JNK及p-ERK1/2的灰度值分别为1.01±0.24,1.02±0.1,姜黄素联合比卡鲁胺对PC3细胞的p-SAPK/JNK及p-ERK1/2的灰度值分别为1.76±0.27,1.65±0.17,联合给药组与单药组比较,差异具有统计学意义(P<0.05)。(2)姜黄素对DU145细胞的p-SAPK/JNK及p-ERK1/2的灰度值分别为1.29±0.11,1.54±0.3,比卡鲁胺对DU145细胞的p-SAPK/JNK及p-ERK1/2的灰度值分别为1.04±0.14,1.08±0.07,姜黄素联合比卡鲁胺对PC3细胞的p-SAPK/JNK及p-ERK1/2的灰度值分别为1.54±0.23,1.98±0.31,联合给药组与单药组比较,差异具有统计学意义(P<0.05)。(3)姜黄素对PC3细胞的MUC1-C及P65的灰度值分别为0.5±0.03,0.49±0.07;比卡鲁胺对PC3细胞的MUC1-C及P65的灰度值分别为0.74±0.01,0.72±0.08;姜黄素联合比卡鲁胺对PC3细胞的MUC1一C及P65的灰度值分别为0.33±0.04,0.29±0.03;联合给药组与单药组比较,差异具有统计学意义(P<0.05)。(4)姜黄素对DU145细胞的MUC1-C及P65的灰度值分别为0.48±0.07,0.46±0.09;比卡鲁胺对PC3细胞的MUC1-C及P65的灰度值分别为0.81±0.07,0.83±0.04;姜黄素联合比卡鲁胺对PC3细胞的MUC1-C及P65的灰度值分别为0.26±0.03,0.28±0.06;联合给药组与单药组比较,差异具有统计学意义(P<0.05)。4. SAPK/JNK抑制剂SP600125及ERKl/2抑制剂PD98059对激素非依赖性细胞PC3、DU145均具有作用,姜黄素作用后,添加激酶抑制剂,能够使MUC1-C及P65蛋白的蛋白表达量上调,且差异具有统计学意义(P<0.05)。5.通过转染过表达质粒MUC1-C及P65,MTT测定其PC3、DU145细胞的抑制作用,结果显示差异具有显著性意义(P<0.05)。转染过表达质粒后,测定MUC1-C、P65蛋白的表达情况,可以得出转染姜黄素干预后蛋白表达增多,差异具有统计学意义(P<0.05)。6.通过转染MUC1-C过表达质粒,可以引起p-ERK1/2及SAPK/JNK的变化,转染后的细胞导致激酶蛋白的下降,其差异具有统计学意义(P<0.05)。结论:1.姜黄素单独对PC3、DU145、LNCaP三种进行干预,均能抑制其增值。姜黄素联合比卡鲁胺对三种细胞的作用优于单药处理的作用,说明姜黄素对比卡鲁胺治疗激素非依赖性前列腺癌有增效增敏作用。2.姜黄素单独使用对PC3、DU145细胞的MUC1-C、P65蛋白的表达具有调节作用。姜黄素对p-SAPK/JNK及p-ERK1/2调节进而影响两种目的蛋白的表达。姜黄素联合康士得对PC3、DU145细胞干预后,对比两药单独给药组,对MUC4-C、P65蛋白的表达下降。在MAPK信号通路中,姜黄素联合比卡鲁胺对p-SAPK/JNK及p-ERK1/2蛋白正向调节作用优于姜黄素、比卡鲁胺单独使用组。在激素非依赖性前列腺癌对比卡鲁胺不敏感的基础上,联合姜黄素治疗激素非依赖性前列腺癌有一定的增敏作用。中药单体联合比卡鲁胺增强激素非依赖性前列腺癌的敏感性不止作用于一条或几条信号通路。肿瘤细胞的生长及凋亡涉及复杂的信号通路,我们需要进一步的研究,探讨MUC1-C蛋白与P65之间的关系。