模拟空间诱变菌株铜绿假单胞菌代谢产物活性的研究

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鼠李糖脂是铜绿假单胞菌代谢产生的新型表面活性剂,不仅能乳化、增溶、降低表面活性,还具有抗菌抗肿瘤的功效。但鼠李糖脂产量低,成本高昂,限制其进一步研究。选育鼠李糖脂高产菌株及开发利用发酵液中的其他有效成份成为降低鼠李糖脂生产成本的有效办法。本实验通过模拟空间诱变选育出鼠李糖脂高产铜绿假单胞菌,然后进行大量发酵,研究其代谢产物各组分的活性。主要研究结果如下:1.将实验室保藏菌种N1207通过微生物形态学、生理生化及16S rDNA进行鉴定。该细菌为革兰氏阴性杆状细菌;进化关系分析表明该菌与铜绿假单胞菌S164S的同源关系最近。由此判断该菌为铜绿假单胞菌,命名为Pseudomonas aeruginosa N1207。将该菌进行模拟空间诱变,筛选出鼠李糖脂高产菌株M14808。2.通过摇瓶法及发酵罐法对铜绿假单胞菌M14808进行大量发酵,将发酵液分离提纯,得五种代谢产物,分别为黄色、蓝色色素,脂肽,单、双鼠李糖脂。以双鼠李糖脂为阳性对照,对代谢产物的生物活性进行检测。抑菌实验结果表明,脂肽对革兰氏阴性、革兰氏阳性、真菌均具有一定的抑制效果。抗肿瘤实验结果表明,蓝色色素作用于细胞HepG2的IC50浓度最低,为15.67±0.13μg/mL。脂肽作用于细胞A549的IC50最低,为82.039±2.06μg/mL3.实验筛选出诱变株M14808的代谢产物蓝色色素及脂肽。通过质谱、傅里叶红外对蓝色色素和脂肽进行鉴定,判断蓝色色素为绿脓菌素,脂肽分子中含有饱和碳链及酰胺键。将绿脓菌素与脂肽进行抗肿瘤机理的初步探讨,绿脓菌素与脂肽均具有促进细胞凋亡的作用。
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