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随着改革开放的不断深入,国民经济高速增长,我国食品药品行业迎来了前所未有的快速发展。然而近几年,一些商家通过在食品或者保健食品中加入药物成分,从而使产品获得本身不具备的功效,以此获取暴利。本文针对食品药品中非法添加硝苯地平的行为,研发可检测硝苯地平的胶体金层析试纸条,为食药监管部门日常基层监管工作提供帮助。 首先,采用活泼酯法制备硝苯地平人工抗原,通过紫外光谱法对人工抗原进行初步鉴定,结果表明人工抗原偶联成功。 其次,通过动物免疫试验制备硝苯地平单克隆抗体,建立ELISA法对单克隆抗体的效价和特异性进行了测定,单克隆抗体腹水效价为l:5×l04~l:2×l05,抗体(J5F4)对硝苯地平的IC50为225.3ng/ml,同尼群地平、尼莫地平的交叉反应率分别为9.57%和6.30%,得到的抗体特异性较好。 最后,通过制备纯化金标抗体、组装试纸条,确定影响每个步骤的因素参数,获得制备胶体金层析试纸条的最佳条件,制备的胶体金粒径为20~40nm,单抗的最佳标记量为5.0μg/ml,单抗标记最佳的pH为9.0,抗原的最佳包被量为7.0μl,二抗的最佳包被量为9.0μl,胶体金标记抗体量为5.0μl,胶体金免疫层析试纸条的目测检测限为1.0mg/L。 经验证,所研发的硝苯地平试纸条的重复性、稳定性、假阳性及假阴性率也均符合要求。 本研究研发出硝苯地平胶体金免疫层析试纸条,并确定制备胶体金层析试纸条的最佳条件,为检测硝苯地平提供了一种省时、高效、操作简单的检测方法,为监管部门现场初步筛选提供技术支持,同时为其他非法添加物试纸条的研制提供借鉴。 下一步,将尝试对一些结构相似的药物使用其共同部分设计人工抗原,再以此为基础研制可以筛查一类药物的试纸条,最终大大提高现场筛查的效率。