金露梅与EGb761的抗氧化协同效应及其机制初探

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几乎所有的生命现象和疾病都与自由基对机体的氧化损伤有关。研究发现,单一活性成分的抗氧化效果往往弱于混合物。某些抗氧化剂经过复合,其化学成分并不等于简单相加,而是表现出减毒、增效甚至产生单一活性成分不具备的药理活性,说明组分间存在着协同效应,且有助于提高其抗氧化能力。研究抗氧化物的协同效应及反应机理,既可把单一成分研究提高到新的水平,又能为复杂的配伍研究及应用奠定一定的理论基础,这在进一步揭示配伍理论的科学内涵、抗氧化过程的本质及提高抗氧化效果和有效使用天然抗氧化剂方面具有重大意义。金露梅(Potentilla fruticosa)为蔷薇科(Rosaceae)委陵菜属(Potentilla)落叶灌木,广泛分布于北温带寒冷地区,蕴藏量大。已有研究结果显示,金露梅叶含有丰富的天然抗氧化剂,其活性高于合成抗氧化剂BHT和鼠尾草,极具开发利用潜能。银杏叶提取物(EGb761,简称EGb)为公认的天然抗氧化剂,含有丰富的黄酮类化合物,常被用作治疗外周动脉疾病和器质性脑综合症,还可以使人体免受外部自由基的伤害。为了获得高效并具有多种功能性的复合抗氧化剂,本研究对金露梅叶和EGb的抗氧化协同效应进行了研究,并探讨了其作用机制,为有效使用抗氧化剂提供理论依据。研究结果如下:(1)对委陵菜属三种植物的有效成分含量及抗氧化活性进行了比较与分析,发现金露梅的多酚含量和总黄酮含量均为最高,分别为84.9322±0.5033mmolequiv. GAE/100g DW和84.1365±0.0349mmol equiv. QUE/100g DW,同时具有强的抗氧化活性,分别为DPPHIC50(16.87μg/mL),ABTS(2763.48μmol Troloxequivalent/g)和FRAP(1398.70μmol Trolox equivalent/g)。(2)对金露梅的丙酮提取物进行了靶标分离,得到了13个次级萃取物,其中,C-3和D-2的抗氧化活性最强,DPPHIC50分别为5.28±0.13和4.81±0.06μg/mL;ABTS分别为8314.94±7.55和5117.02±7.24μmol Trolox equivalent/g;FRAP值分别为3667.04±9.48和2041.11±13.12μmol Trolox equivalent/g。(3)等辐射分析显示,金露梅叶的丙酮提取物(A)与EGb配伍比例为5:1(v/v)时,抗氧化协同增效作用最强。C-3+EGb也具有相似的协同效应,在DPPH与ABTS体系下协同(γ值分别为0.840和1.155),在FRAP体系下相加(γ=1.053)。然而D-2+EGb却只表现出简单的相加效应。推测C-3可能是导致金露梅叶与银杏叶提取物产生协同效应的重要组分。(4)探讨了C-3+EGb配伍前后的化学组成及酚类化合物含量差异,发现配伍前后化学组成没有差异,总酚和总黄酮的含量也没有发生变化,只表现出简单的相加。(5)为进一步探讨协同机制,将C-3与EGb中的4个化合物(儿茶素、山奈素、槲皮素和异鼠李素)分别进行配伍研究,发现当C-3与异鼠李素的配伍比例为5:1(C-3:EGb)时,对DPPH与ABTS表现出了明显的抗氧化协同效应,协同作用指数γ分别为0.669和1.249。在FRAP体系下,配伍比例为1:1时,效果最好(γ=1.385)。将异鼠李素与C-3中的6个化合物(儿茶素、咖啡酸、金丝桃苷、芦丁、鞣花酸和槲皮素)进行配伍,发现咖啡酸和异鼠李素表现出来很强的抗氧化协同作用,实验测量值明显高于理论值(P<0.05),并且在1:1下协同作用最强,协同系数分别为DPPH(γ=0.711)、ABTS(γ=1.693)、 FRAP(γ=1.474),另外金丝桃苷与异鼠李素也表现出了协同作用。研究结果显示,金露梅与EGb的协同效应可能是由于化合物之间的相互作用引起的,其作用的方式及机制还有待进一步研究。
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