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微型生物是全球海洋生物量的主要贡献者,在海洋物质循环和能量流动及维持生态系统多样性与稳定性中发挥着不可或缺的重要作用,其中异养细菌分布广泛,被认为在海洋碳、氮、硫等重要生源物质的生物地球化学循环中起着重要作用。
本研究通过蛋白质组学及荧光定量技术,结合生物信息学分析,对一株分离自中国南海的好氧不产氧光合异养菌(AerobicAnoxygenicPhototrophicBacteria,AAPB)——CitromicrobiumbathyomarinumJL354进行了室内碳源胁迫下的蛋白质组学研究,研究其碳源胁迫下的蛋白与mRNA表达状况,以期了解AAPB环境适应的分子机制。本研究同时对分离自台湾东北部龟山岛海域热液口羽状流区的细菌进行鉴定分析,依据鉴定实验结果,确定了一个细菌新属和新种。主要研究结果如下:
(1)基于C.bathyomarinumJL354基因组注释构建了其葡萄糖核心代谢通路,揭示了由于糖酵解途径关键酶编码基因——6-磷酸果糖激酶基因(6-phosphofructokinasegene,pfk)的缺失,C.bathyomarinumJL354碳水化合物的分解代谢主要通过Entner-Doudoroff途径和氧化性磷酸戊糖途径。
通过LC-MS/MS技术构建的肽指纹图谱分析揭示出C.bathyomarinumJL354在光周期碳营养限制条件下表达的蛋白主要涉及到氨基酸代谢、核酸和脂质代谢相关蛋白、信号转导相关蛋白以及为其基础代谢提供能量的能量代谢相关蛋白。
通过比较蛋白质组学技术和实时荧光定量技术分别对0.05%和0.5%葡萄糖单一碳源培养下指数生长期和稳定期生长的C.bathyomarinumJL354进行基因表达分析。研究表明细胞生长和繁殖相关蛋白或酶在生长指数期上调表达(upregulation)。当细胞培养进入稳定期后期,随着营养物质的不断消耗、代谢产物的不断积累以及溶解氧浓度逐渐降低等环境因素持续恶化,协助细菌适应不利环境的相关蛋白或酶如压力蛋白(stressproteins)和次级代谢相关蛋白(secondarymetabolitesbiosynthesisproteins)被检测到有上调表达。细菌的葡萄糖核心代谢途径的相关酶和蛋白(在蛋白质水平和RNA水平),在不同碳源浓度培养过程中的表达量比较恒定。上述结果反映了海洋异养细菌在应对营养胁迫方面采取的相关生存策略。
(2)通过16SrRNA序列比对分析发现,JLT2003T属于Rhodobacteraceae科,和Pontibacamethylaminivorans相似性最高(94.8%)。结合JLT2003T脂肪酸分析、呼吸醌含量、G+C含量及各种生理生化特征等测定结果,发现了一个新种,并确定其进化地位为Rhodobacteraceae科一个新属,定名为Oceaniovalibusguishaninsulagen.nov.,sp.nov.。