金黄色葡萄球菌(Staphyloccocus aureus,SA),广泛分布于空气、土壤和水中,它也经常分布于人体皮肤毛囊、皮脂腺管、鼻囊和肠道中,因此食品、肉及肉制品极易受其污染。近年来,用于快速检测的胶体金免疫层析技术发展迅速,该方法具有特异性强、灵敏度高、操作简便、快速等优点。本研究制备的金黄色葡萄球菌重组蛋白SPA为金黄色葡萄球菌的胶体金免疫层析试纸条的研制提供了保证。本研究以金黄色葡萄球菌全基因组为模板,根据NCBI登录的SPA序列设计并合成特异性引物,扩增出特异性SPA基因片断。将扩增产物连接到质粒pMD18-T中并转化至E.coli DH5α中,进行测序。将测序结果正确的重组质粒pMD18-T-SPA进行EcoRⅠ/XhoⅠ双酶切,将SPA酶切产物和同样酶切处理的pET-28a(+)进行连接。转化重组质粒pET-28a(+)-SPAE.coli BL21中以构建原核表达系统,筛选阳性重组质粒pET-28a (+)-SPA。原核重组蛋白SPA表达实验显示,当诱导剂IPTG的浓度为0.6mmol/L、诱导时间为4h、诱导温度为37℃时,E.coli BL21可成功表达重组SPA蛋白。本研究通过Ni-NTA His·Bind Resin对重组蛋白SPA进行纯化并通过透析进行复性。免疫印迹试验和酶联免疫吸附试验表明,重组蛋白SPA具有很高的抗原活性,本实验成功制备的重组蛋白SPA为后续实验奠定了基础。