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目的 应用常规细胞遗传学分析结合荧光原位杂交技术(双色FISH)检测累及单核系统急性髓性白血病(acute myeloid leukemia,AML)中混合细胞系白血病基因MLL(mixed lineage leukemia gene或称为ALL1基因或HRX基因)受累情况的表达，探讨MLL基因受累的检测在急性白血病分型诊断中的意义。 方法 (1)标本获取及分组采集113例白血病病人及20例对照组骨髓进行染色体培养制备及细胞冻存，113例病人(男67例，女46例，年龄8月-80岁，中位年龄32岁)，按FAB分型为粒细胞性白血病组(myeloid leukemia,ML)和淋巴细胞性白血病组(lymphoblastic leukemia,LL)。①AML组70例：初诊病人51例，治疗中未缓解7例，缓解12例，包括M1型3例，M2型16例，M3型20例，M4型14例，M5型17例。②ALL组28例：初诊病人16例及未缓解病人4例，完全缓解病人8例。包括L1型9例，L2型15例，L3型4例。初诊及未缓解病人骨髓及外周血幼稚细胞比例均大于60％。③CML组10例，初诊病人9例及未缓解病人1例。④CLL组5例，初诊病人4例及未缓解病人1例。对照组20例(男11例，女9例，年龄7-52岁，中位年龄23.5岁)，均为非恶性血液肿瘤患者，骨髓常规检查未见异常。24小时短期体外培养，收获前1小时予0.05μg／ml秋水仙酰胺处理，预温37℃的0.075mol／IKCL低渗30分，预固定1次，固定3次，离心，制备细胞悬液，滴片，玻片标本于预温87.5℃的Earle’s溶液中分别温育95，100，105分钟，各取片1-2张，10％的Giemsa染色液染色20分钟，流水冲洗，待干，镜检，行细胞遗传学分析，检测异常核型，特别是累计11q23的核型变化。(2)常规镜检及检查结果判定：已制备的玻片标本予与常规镜检，每个异常玻片标本镜检10个分裂像，正常玻片标本镜检20个分裂像。镜检结果按人类细胞遗传学国际命名体制(ISCN 1995)命名；(3)荧光原位杂交及结果判断：双色FISH探针来源于Vysis Spectra Vysion双色FISH探针试剂盒(Applied Imaging公司)。此D—FISH探针是经流式细胞仪分选、显微切割后并经PCR扩增的双色探针，经缺口平移法应用2种荧光素标记，制备成探针池。按操作步骤行原位杂交。应用易位涉及的基因的全长探针，采用红绿两种荧光素分别标记被断裂点分开的1个基因的两部分，结果正常细胞中可见2个黄色信号，而异常细胞中可见1红、1绿和1个黄色(红绿融合)或1绿和1个黄色杂交信号，表明发生了MLL基因断裂与重排。将所得数据进行统计学分析，判中文摘要断MLL基因受累情况。 结果(l)各组异常核型结果:①异常核型结果:AML组共发现异常核型24例，其中，Ml型:2例，MZ型:3例，M3型:5例，M4型:7例，MS型::7例;ALL组共发现异常核型5例，Ll型:2例，LZ型:3例，L3型:0例;CML组发现异常核型9例;CLL组发现异常核型2例。对照组0例②异常核型检出率:MI型:66%，MZ:18.75%，M3型:25%，M4:50%，MS:41.18%;Ll:22.22%，LZ:20%，L3:0%;AML异常核型检出率为34.29%;ALL检出率为17.86%;CML:90%;CLL:40%。总检出率为35.40%③M4侧5组少见核型检出结果:(I)涉及11p巧核孔素98伽uP98)基因的易位，见于AML一M4，共2例。NUP98的对手基因大多为同源盒(HOX)家族之一或为其他基因。(lI)t(16;21)印11;q22)，见于AML一MS型1例且表现为复杂型异位，形态学有白血病细胞吞噬血细胞的现象，Aue:小体未见，获CR，但早期复发，生存期未超过3年，分子水平上有FuS一ERG融合基因形成。(nl)灯del(11)(q23):AML一MS及AML一MZ中报道累及1 1 q23的核型异常共4例，分子学可见MLL基因改变。(W)+4见于不到1%的AML，多见于AML一M4，我们的研究中发现AML一MS中两例，无骨髓病态造血病史，未见到双微体。(v)+8见于8%的AML，为最常见的染色体三体，预后中等。我们报道AML一MS型一ff[J有+8改变。(Vl)t(8;21)白血病可有额外的染色体异常，其中性染色体丢失最多见(73%)，其次为9号染色体长臂的中间缺失(gq一)( 11%)。我们报道AML一M4型1例t(8;21)改变;1例(9q一)改变。(vII)在我们的研究中，还发现了一个世界上没有报道的治疗相关性白血病的新的染色体易位Msa:46，xy，t(5;12)(q23;q 13)，目前已经在上海瑞金医院血液病研究所进行FISH定位，希望应用条带序列FlsH探针将精确断裂位点定出，并应用分子生物学的方法，拿到融合基因。④双色FISH结果:3例AML一MS和1例AML一MZ标本间期细胞及分裂像中均见1红、l绿和1个黄色(红绿融合)杂交信号，表明发生了MLL基因断裂与重排，符合细胞遗传学结果所见。 结论本研究采用常规细胞遗传学方法结合荧光原位杂交技术，对113例急性白血病病人染色体标本和20例对照组染色体标本进行研究，同时结合临床资料，着重研究了累及单核系统急性髓性白血病的细胞遗传学情况。发现临床上t(8;21)(q22;q22)或AMLI一ETo融合基因阳性AML一MZ或M4成人患者对治疗反应佳，cR率高(90%)，Ms52个月，但易于复发。儿童患者的预后不如成人患者理想;有t(l5:17)易位或PML.RAR。融合基因的AML一 M3病例应用全反式维甲酸治疗有效，反之则无反应，表明t(l5;17)的有无对AML一M3的治中文摘要疗有指导作用，而伴有t(11;17)(q23;qZI)和t(5:17)的AML一M3对维甲酸治疗