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时间分辨荧光微球是一种性能优异的新兴免疫标记物,本研究将时间分辨荧光微球作为标记物应用于免疫层析平台与磁分离时间分辨免疫分析平台上,并对两平台进行全面而准确的试剂性能评价和临床可行性评估。本课题实验内容主要分为三大部分:(1)研制基于铕螯合物荧光微球的免疫层析定量检测NGAL试纸条;(2)研制基于铕螯合物荧光微球的免疫层析定量检测Anti-HBc试纸条;(3)研制基于时间分辨荧光微球的AFP/Freeβ-HCG双标记磁分离时间分辨荧光免疫分析试剂。实验设计涵盖了建立和优化反应体系、在最优的反应体系下全面评价自制试剂的各项性能指标作,包括剂量-反应曲线、分析灵敏度、准确度、精密度、特异性、抗干扰性分析以及临床可行性。实验一结果:(1)基于铕螯合物荧光微球的免疫层析定量检测NGAL试纸条的分析灵敏度为0.30 ng/mL,线性范围达10～6000 ng/mL。回收率在96.80%～108.08%之间,准确度好;分析内和分析间变异系数分别在为5.23%～8.19%和7.02%～9.24%之间;未与高浓度的α1-MG、HGF、α1-AAG和MMP-2发生交叉反应,且不受高浓度血红蛋白、甘油三酯、胆红素干扰,特异性良好。用ELISA法和本试剂测定114例尿液样本进行线性相关分析,r=0.9846(P<0.001),显著相关。实验二结果:(1)基于铕螯合物荧光微球的免疫层析定量检测Anti-HBc试纸条的分析灵敏度为0.31 IU/mL,线性范围为0.63～640 IU/mL。回收率在92.95%～97.12%之间,分析内和分析间变异系数分别在为5.63%～7.79%和6.93%～9.82%;测定与乙型肝炎相关病毒感染患者的抗体阳性血清样本,结果表明无明显交叉反应;高浓度血红蛋白、甘油三酯、胆红素也不会对检测产生干扰,特异性良好。用雅培CMIA法和本试剂对231例血清样本进行检测,特异性符合率为95.90%,敏感性符合率为99.08%,经配对卡方检验,P=0.219,两种检测方法无显著差异,结合κ系数检验,κ=0.948(P<0.001),P=0.000,两种方法吻合度强;用TRFIA法和本试剂测定108例血清做线性相关分析,r=0.9605(P<0.001),显著相关。实验三结果:(1)基于时间分辨荧光微球的AFP/Freeβ-HCG双标记磁分离时间分辨荧光免疫分析试剂AFP、Free β-HCG的分析灵敏度分别为0.10 IU/mL、0.35ng/mL,线性范围分别为2～480 IU/mL、3～200ng/mL。回收率结果分别在93.8%～100.36%之间(AFP)和 97.8%～106.47%之间(Free β-HCG),分析内和分析间变异系数均<10%;未与高浓度CEA、CA125、CA15-3、CA19-9、HCG、LH、FSH、TSH及HAS发生交叉反应,高浓度血红蛋白、甘油三酯、胆红素也不会对检测产生干扰,特异性良好。TRFIA法和自制试剂测定134例血清样本做线性相关分析,r=0.9869和0.9904(P<0.001),显著相关。本课题成功建立两个基于时间分辨荧光微球的免疫分析技术平台,具有灵敏度高、线性范围宽及快速检测的优点,临床应用前景十分广阔。