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目的:改进斑点酶联免疫吸附试验(dot enzyme linked immunosorbant assay, Dot-ELISA),采用真空泵抽吸法浓缩检测样本,以期提高此方法的敏感性;通过实验分析此方法改进前后的优劣,并确定试验程序中最适工作条件及方法的重复性和稳定性。应用改进的Dot-ELISA检测脑脊液(cerebrospinal fluid,CSF)中结核分枝杆菌(mycobacterium tuberculosis,MTB)特异性抗原培养滤液蛋白10(culture filtrate protein 10,CFP10)和6000早期分泌性抗原靶(6kDa early secretory antigenic target,ESAT-6),对比其他辅助检查及同类研究,评价其对结核性脑膜炎(tuberculous meningitis,TBM)的诊断价值。方法:1、用改进前和改进后的Dot-ELISA检测同一批临床确诊的结核性胸腔积液25例和非结核性胸腔积液31例,统计分析方法改进前后有无差异性;改变实验程序中的工作条件,利用对比实验确定最适工作条件,并评价改进后此方法的重复性和稳定性。2、收集58例临床诊为TBM患者的CSF,53例非TBM患者的CSF,应用改进后的Dot-ELISA分别检测CSF中CFP10和ESAT-6,同时对入选的患者和采集的CSF作相关的病史统计和辅助检查,并对结果进行统计分析。结果:1、改进前Dot-ELISA检测的敏感性为76.0%,改进后的敏感性为92.0%,用最适工作条件检测的敏感性为96.0%,改进后和用最适工作条件与改进前比较存在统计学差异(P<0.05);改进前特异性为93.5%,改进后和用最适条件时特异性皆为90.3%,改进前后特异性比较无统计学差异(P>0.05),验证其特异性的阻断实验结果为阳性;重复性、稳定性试验结果表明,所建立的Dot-ELISA检测结果的可重复率为100%。2、检测CSF中CFP10抗原的敏感性为93.1%,特异性为92.5%;检测ESAT-6抗原的敏感性为91.4%,特异性为94.3%;敏感性和特异性均普遍高于针对MTB菌体或菌体物质进行的检测及同类研究,如抗酸染色、结核杆菌培养、PCR等。结论:1、所建立的Dot-ELISA是一种有较高敏感性和特异性且重复性和稳定性较好的检测方法,能用于结核特异性抗原的检测和结核性胸腔积液的辅助诊断。2、应用改进的Dot-ELISA检测CSF中CFP10和ESAT-6对诊断TBM有很高的敏感性和特异性,明显优于针对MTB菌体或菌体物质进行的检测和同类研究,目前其可作为优于其它辅助检查的一项新的检查手段用于临床TBM的诊断。3、本研究为MTB特异性抗原用于结核病的诊断奠定了基础。