【摘 要】
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本实验在探索山羊卵母细胞孤雌激活条件及胞质去除对山羊孤雌胚胎体外发育影响的基础上，将人胚胎成纤维细胞通过体细胞核移植技术移植入山羊去核卵母细胞中，目的在于探讨山羊成熟卵母细胞能否支持人体细胞核重编程，并使重组胚在体外完成其早期发育。 方法 1．人胚胎成纤维细胞的分离培养 采用酶消化法和差速贴壁法，从人工终止妊娠的废弃胚胎躯干部组织中分离获得人胚胎成纤维细胞，并在体外进行传代培养。
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本实验在探索山羊卵母细胞孤雌激活条件及胞质去除对山羊孤雌胚胎体外发育影响的基础上，将人胚胎成纤维细胞通过体细胞核移植技术移植入山羊去核卵母细胞中，目的在于探讨山羊成熟卵母细胞能否支持人体细胞核重编程，并使重组胚在体外完成其早期发育。 方法 1．人胚胎成纤维细胞的分离培养 采用酶消化法和差速贴壁法，从人工终止妊娠的废弃胚胎躯干部组织中分离获得人胚胎成纤维细胞，并在体外进行传代培养。光镜下观察其生长特点，MTT法绘制生长曲线，对第10代细胞进染色体计数分析，流式细胞仪对不同细胞周期同步化方法处理后的细胞周期进行分析。 2．山羊卵母细胞孤雌激活 将从山羊卵巢中获得的COCs进行体外成熟培养，得到排出第一极体的山羊成熟卵母细胞。分别采用温度（25℃）、乙醇联合6-DMAP、Ionomycin联合6-DMAP方法对山羊卵母细胞进行孤雌激活处理，体外培养激活处理后的孤雌胚胎，观察其发育情况。 3．胞质去除对山羊孤雌胚胎体外发育的影响 将体外成熟培养后排出第一极体的山羊卵母细胞分别去除不同比例细胞质（1/4以下、1/4～1/3、1/3～1/2、1/2以上），以Ionomycin联合6-DMAP
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