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第一部分CYP1A1对巨噬细胞极化的影响及极化标志物的筛选
目的：巨噬细胞向M2型极化参与重症感染的组织修复和抗炎过程，但该过程的分子机制目前仍不完全清楚。研究表明CYP1A1参与多种炎症免疫，但在巨噬细胞极化中的作用，未见相关报道。本研究旨在筛选M2极化过程中的重要分子及其标志物鉴定，验证CYP1A1在巨噬细胞向M2型极化中的作用。
方法：(1)采用定量反转录-聚合酶链反应(RT-qPCR)检测IL-4刺激2、4、6h后小鼠腹腔巨噬细胞内M2型极化标志分子精氨酸酶-1(Arg-1)、几丁质酶3样蛋白-3(chitinase 3 like-3，YM-1)及CYP1A1的mRNA表达；(2)体外构建CYP1A1高表达的RAW264.7细胞(CYP1A1/RAW )、CYP1A1敲除的RAW264.7细胞(CYP1A1KO/RAW)及CYP1A1低表达的RAW264.7细胞(NC/RAW )。采用RT-qPCR及WesternBlot法对比IL-4刺激后两种细胞内Arg-1表达情况。
结果：(1)经IL-4刺激后，小鼠腹腔原代巨噬细胞内Arg-1、YM-1的mRNA表达即较PBS对照组明显增加，说明IL-4诱导巨噬细胞向M2型极化成功；同时，极化的小鼠腹腔原代巨噬细胞内CYP1A1的mRNA表达也较PBS对照组明显增加，说明巨噬细胞向M2型极化时CYP1A1表达增强；两类极化标志分子Arg-1和YM-1之间，Arg-1表达量高于YM-1。(2)经IL-4刺激后，CYP1A1/RAW组内Arg-1的表达较NC/RAW组的增强，CYP1A1KO/RAW组内Arg-1的表达较NC/RAW组的减弱，说明CYP1A1可促进NC/RAW细胞向M2型极化。
结论：(1)IL-4诱导巨噬细胞向M2极化后，Arg-1表达显著增强，可将其作为M2极化的标志物。(2)CYP1A1在已极化的巨噬细胞中的表达显著高于未极化组，提示CYP1A1可能参与M2型极化过程。(3)IL-4刺激CYP1A1/RAW细胞和NC/RAW细胞后，CYP1A1/RAW细胞极化后Arg-1的表达量显著高于NC/RAW细胞，而CYP1A1KO/RAW细胞的Arg-1表达在刺激前后无变化，提示CYP1A1可能促进巨噬细胞向M2型极化。
第二部分CYP1A1通过JAK-1/STAT6通路促进巨噬细胞向M2型极化
目的：研究表明，IL-4介导的巨噬细胞M2型极化的最主要途径有酪氨酸蛋白激酶-1/信号转导和转录激活因子6(JAK-1/STAT6)及磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B(PI3K/Akt )通路。CYP1A1可通过JAK-1/STAT6通路调节多种免疫活动，但CYP1A1调控对巨噬细胞极化的分子机制目前仍不清楚。本研究通过筛选巨噬细胞向M2型极化的重要信号途径，探讨CYP1A1促进巨噬细胞极化的分子机制。
方法：(1)采用蛋白质免疫印迹试验(Western Blot)检测IL-4刺激6、12、24h后细胞内JAK-1/STAT6通路磷酸化及CYP1A1、Arg-1蛋白表达。(2)同样方法对比CYP/RAW和NC/RAW细胞内JAK-1/STAT6及PI3K/Akt通路磷酸化情况，比较CYP1A1KO/RAW及NC/RAW细胞内JAK-1/STAT66通路磷酸化情况。
结果：(1)IL-4刺激6h后，小鼠腹腔原代巨噬细胞内磷酸化JAK-1(p-JAK-1)、磷酸化STAT6(p-STAT6)、Arg-1及CYP1A1的信号即较PBS对照组明显增强，以12h最为显著，之后逐渐减弱。说明CYP1A1高表达时M2型巨噬细胞内JAK-1/STAT6通路磷酸化表达增强，通路被激活。(2)IL-4刺激后2h，CYP1A1/RAW细胞内p-JAK-1、p-JAK-3均较PBS对照组增强，但CYP1A1/RAW细胞内p-STAT6的增强幅度较NC/RAW细胞更加明显，说明CYP1A1通过JAK-1/STAT6通路来促进巨噬细胞极化；而CYP1A1/RAW细胞内PI3K/Akt通路下游分子Akt的信号较NC/RAW细胞明显减弱，说明CYP1A1不通过该通路促进巨噬细胞极化。在CYP1A1/KORAW组及NC/RAW组中，经过同样的IL-4刺激后，JAK-1/STAT6并无磷酸化现象。
结论：(1)CYP1A1通过JAK-1/STAT6通路调控小鼠巨噬细胞极化；(2)IL-4刺激下，CYP1A1/RAW细胞中p-JAK-1、p-JAK-3、p-STAT6水平显著高于NC/RAW细胞，而CYP1A1/KORAW细胞无该途径磷酸化现象，提示CYP1A1通过JAK-1/STAT6通路而非PI3K/Akt通路调控巨噬细胞向M2型极化。
目的：巨噬细胞向M2型极化参与重症感染的组织修复和抗炎过程，但该过程的分子机制目前仍不完全清楚。研究表明CYP1A1参与多种炎症免疫，但在巨噬细胞极化中的作用，未见相关报道。本研究旨在筛选M2极化过程中的重要分子及其标志物鉴定，验证CYP1A1在巨噬细胞向M2型极化中的作用。
方法：(1)采用定量反转录-聚合酶链反应(RT-qPCR)检测IL-4刺激2、4、6h后小鼠腹腔巨噬细胞内M2型极化标志分子精氨酸酶-1(Arg-1)、几丁质酶3样蛋白-3(chitinase 3 like-3，YM-1)及CYP1A1的mRNA表达；(2)体外构建CYP1A1高表达的RAW264.7细胞(CYP1A1/RAW )、CYP1A1敲除的RAW264.7细胞(CYP1A1KO/RAW)及CYP1A1低表达的RAW264.7细胞(NC/RAW )。采用RT-qPCR及WesternBlot法对比IL-4刺激后两种细胞内Arg-1表达情况。
结果：(1)经IL-4刺激后，小鼠腹腔原代巨噬细胞内Arg-1、YM-1的mRNA表达即较PBS对照组明显增加，说明IL-4诱导巨噬细胞向M2型极化成功；同时，极化的小鼠腹腔原代巨噬细胞内CYP1A1的mRNA表达也较PBS对照组明显增加，说明巨噬细胞向M2型极化时CYP1A1表达增强；两类极化标志分子Arg-1和YM-1之间，Arg-1表达量高于YM-1。(2)经IL-4刺激后，CYP1A1/RAW组内Arg-1的表达较NC/RAW组的增强，CYP1A1KO/RAW组内Arg-1的表达较NC/RAW组的减弱，说明CYP1A1可促进NC/RAW细胞向M2型极化。
结论：(1)IL-4诱导巨噬细胞向M2极化后，Arg-1表达显著增强，可将其作为M2极化的标志物。(2)CYP1A1在已极化的巨噬细胞中的表达显著高于未极化组，提示CYP1A1可能参与M2型极化过程。(3)IL-4刺激CYP1A1/RAW细胞和NC/RAW细胞后，CYP1A1/RAW细胞极化后Arg-1的表达量显著高于NC/RAW细胞，而CYP1A1KO/RAW细胞的Arg-1表达在刺激前后无变化，提示CYP1A1可能促进巨噬细胞向M2型极化。
第二部分CYP1A1通过JAK-1/STAT6通路促进巨噬细胞向M2型极化
目的：研究表明，IL-4介导的巨噬细胞M2型极化的最主要途径有酪氨酸蛋白激酶-1/信号转导和转录激活因子6(JAK-1/STAT6)及磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B(PI3K/Akt )通路。CYP1A1可通过JAK-1/STAT6通路调节多种免疫活动，但CYP1A1调控对巨噬细胞极化的分子机制目前仍不清楚。本研究通过筛选巨噬细胞向M2型极化的重要信号途径，探讨CYP1A1促进巨噬细胞极化的分子机制。
方法：(1)采用蛋白质免疫印迹试验(Western Blot)检测IL-4刺激6、12、24h后细胞内JAK-1/STAT6通路磷酸化及CYP1A1、Arg-1蛋白表达。(2)同样方法对比CYP/RAW和NC/RAW细胞内JAK-1/STAT6及PI3K/Akt通路磷酸化情况，比较CYP1A1KO/RAW及NC/RAW细胞内JAK-1/STAT66通路磷酸化情况。
结果：(1)IL-4刺激6h后，小鼠腹腔原代巨噬细胞内磷酸化JAK-1(p-JAK-1)、磷酸化STAT6(p-STAT6)、Arg-1及CYP1A1的信号即较PBS对照组明显增强，以12h最为显著，之后逐渐减弱。说明CYP1A1高表达时M2型巨噬细胞内JAK-1/STAT6通路磷酸化表达增强，通路被激活。(2)IL-4刺激后2h，CYP1A1/RAW细胞内p-JAK-1、p-JAK-3均较PBS对照组增强，但CYP1A1/RAW细胞内p-STAT6的增强幅度较NC/RAW细胞更加明显，说明CYP1A1通过JAK-1/STAT6通路来促进巨噬细胞极化；而CYP1A1/RAW细胞内PI3K/Akt通路下游分子Akt的信号较NC/RAW细胞明显减弱，说明CYP1A1不通过该通路促进巨噬细胞极化。在CYP1A1/KORAW组及NC/RAW组中，经过同样的IL-4刺激后，JAK-1/STAT6并无磷酸化现象。
结论：(1)CYP1A1通过JAK-1/STAT6通路调控小鼠巨噬细胞极化；(2)IL-4刺激下，CYP1A1/RAW细胞中p-JAK-1、p-JAK-3、p-STAT6水平显著高于NC/RAW细胞，而CYP1A1/KORAW细胞无该途径磷酸化现象，提示CYP1A1通过JAK-1/STAT6通路而非PI3K/Akt通路调控巨噬细胞向M2型极化。