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研究背景：脑胶质瘤是中枢神经系统最常见的恶性肿瘤，约占所有颅内肿瘤的45％。目前的治疗手段主要包括手术、放疗、化疗及综合治疗等。尽管近年来上述治疗措施已取得长足进步,但由于脑胶质瘤细胞的高增殖速度和高侵袭性，目前疗效仍不甚理想。新的治疗手段基因治疗等虽有望成为治愈胶质瘤的途径之一,但是目前仍缺乏理想可靠的治疗靶标。因此寻找调控胶质瘤细胞恶性生物学行为的分子靶标,明确其在胶质瘤发生发展过程中的病理机制,已成为神经外科领域的研究热点之一。多梳蛋白zeste基因增强子类同源物2(enhancer of zestehomolog2，EZH2)是多梳抑制复合物（Polycomb repressive complex2，PRC2）的催化亚基，它是一种高度保守的组蛋白甲基转移酶，能使组蛋白3第27位赖氨酸（H3K27）三甲化。H3K27三甲基化通常和从植物到果蝇到人类的器官分化基因的沉默相关。有关人类肿瘤研究显示EZH2在包括前列腺、乳腺癌、胶质瘤等广泛的一系列的肿瘤组织中高表达。EZH2的高表达将抑制多种肿瘤抑制基因的表达从而促进肿瘤的增殖、侵袭和转移。因此它被认为是一个新的候选癌基因。RNA干扰技术是近几年迅速发展起来的基因阻断技术，将与目的基因同源的小片段双链RNA分子导入细胞内，进而特异性的降解目的基因的mRNA，是目前基因诊断、基因治疗的有利工具。研究目的：构建并筛选靶向EZH2基因的短发卡RNA(short hairpin RNA，shRNA)的质粒表达载体研究RNA干扰技术抑制EZH2基因的表达后对人胶质瘤U251细胞增殖及凋亡的影响。研究方法：设计并合成针对EZH2基因的带有小发夹结构的DNA片段并克隆至质粒pGPU6/GFP/Neo中，经酶切和测序分析后转染入胶质瘤U251细胞，分别应用实时荧光定量PCR和Western bloting在mRNA和蛋白质水平观察其对EZH2基因表达的沉默效果。将靶向EZH2基因的shRNA质粒转染至U251细胞中，利用四甲基偶氮唑盐(MTT)实验和Annexin V-FITC/PI流式细胞术实验观察转染后U251细胞增殖和凋亡情况。研究结果：重组质粒构建成功，并成功转染入胶质瘤U251细胞，转染效率大约为70%。其中，以靶向hEZH2-715序列的质粒抑制效果最好，其对U251细胞EZH2mRNA和protein抑制率分别为55%和89%。转染shRNA-EZH2后，U251细胞的生长受到明显抑制（p<0.001），在转染96小时候后生长抑制率达到最大，为35.79%；转染48小时候后，U251细胞早、晚期凋亡率分别为26.59%、38.63%，较阴性质粒组和空白对照组均增加，以晚期明显，差异具有显著统计学意义（p<0.01）。研究结论：成功构建了能高效抑制EZH2基因表达shRNA的重组质粒，为下一步探索EZH2在胶质瘤细胞中的生物学作用奠定了基础；EZH2基因的沉默能有效抑制胶质瘤U251细胞的增殖、促进其凋亡；提示EZH2可能成为胶质瘤基因治疗的新靶点。