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目的与意义:基于课题组前期基础,本研究以凉血活血、清泻肝火的赤芍为对象,围绕“源于临床,证于实验,回归临床”的策略思路,采用循证药学手段,辅以临床前瞻性研究方法,融合分子生物学、代谢组学等多学科技术,综合分析重用赤芍治疗淤胆型肝炎的有效性,明确其作用特征与科学内涵,并指导临床合理重用赤芍。故本研究符合中医药理论特色和新意,具有重要的学术价值与科学意义。研究方法:①采用循证药学的方法,以临床重用赤芍相关方剂为研究对象,以Meta分析为手段,分析重用赤芍方剂治疗淤胆型肝炎与重度黄疸的临床随机对照试验,明确重用赤芍治疗淤胆型肝炎与重度黄疸的有效性、血清指标改善特征与不良反应情况。②采用HPLC与UPLC-MS/MS技术,明确赤芍水提物的主要成分变化规律与特征情况,进一步鉴定水提物中的化学成分信息。③运用药理学方法,融合分子生物学技术,以ANIT所致淤胆型肝炎模型大鼠为载体,在明确重用赤芍的作用效应基础上,从氧化应激、炎性反应及摄入/排出转运蛋白的角度,考察赤芍治疗淤胆型肝炎的作用机制。④采用代谢组学技术,结合网络药理学方法,明确赤芍治疗淤胆型肝炎的特征代谢标志物变化规律与作用信号网络特征。⑤采用前瞻性临床研究方法,以代谢组学技术为主要手段,通过比对健康人群、赤芍治疗淤胆型肝炎患者前后的血清中的特征代谢标志物,筛选出临床上可反映预后的内源性标志物。研究结果:(1)重用赤芍相关方剂治疗淤胆型肝炎与重度黄疸的循证药学研究:①研究明确了重用赤芍的相关方剂联用或单用及治疗不同病程的淤胆型肝炎的有效率均显著高于西药对照组(P<0.05);同时,重用赤芍方剂患者的血清ALT、AST、 TBIL、DBIL指标均显著低于西药对照组(P<0.05);重用赤芍组的不良反应发生率与西药对照组之间无显著的差异。②在治疗重度黄疸方面,重用赤芍相关方剂在联用或单用、不同剂量下治疗重度黄疸的有效率均高于西药对照组(P<0.05);重用赤芍方剂患者的血清TBIL、ALT、AST均显著低于单独使用西药治疗组(P<0.05),而两组间DBIL、PT、ALB、γ-GT及不良反应发生率无差异(P>0.05)。(2)重用赤芍治疗淤胆型肝炎的物质基础研究:①研究测定了赤芍饮片与水提物中主要成分芍药苷与芍药内酯苷的含量,并通过建立指纹图谱,明确了赤芍水提物中主要成分的变化规律。②共鉴定出赤芍水提物中10个化学成分,分别为芍药苷、芍药内酯苷、氧化芍药苷、没食子酸、牡丹皮苷E、6’-O-没食子酰芍药苷、没食子酰芍药内酯苷、牡丹皮苷C、苯甲酰芍药苷与丹皮酚,确证了赤芍水提物的化学成分信息。(3)重用赤芍治疗淤胆型肝炎的作用与机制研究:①明确了赤芍水提物可剂量依赖地改善淤胆型肝炎大鼠血清ALT、AST、ALP及γ-GT活性(P<0.05),降低血清TBIL、DBIL、TBA的含量(P<0.05),并减轻肝组织中细胞水肿、坏死及炎性细胞的浸润,改善肝组织病理状态。②在抗氧化应激方面,高剂量赤芍可通过上调Akt而增强Nrf2入核的表达,并诱导GSH的合成酶类GCLc与GCLm表达的增加,进而增强GSH的表达(P<0.05),提高肝组织抗氧化应激能力。③在抑制炎性反应方面,高剂量赤芍可显著抑制NF-κB的入核及调控蛋白IKK的磷酸化,并下调炎性小体NLRP3的表达,从而综合抑制IL-1β的分泌(P<0.05)。④在调节转运蛋白方面,高剂量赤芍可显著改善ANIT所致淤胆型肝炎大鼠肝组织中NTCP、BSEP与MRP2表达的下降(P<0.05),通过调节胆汁的摄入与排泄,进而改善胆汁淤积状态。(4)重用赤芍治疗淤胆型肝炎的作用机制网络研究:①通过代谢组学技术,共鉴定出L(D)-精氨酸、肉碱、泛酸酯、L-色氨酸、2-苯乙酰胺、11-脱氧皮质醇、甘氨胆酸、甘氨鹅脱氧胆酸、牛磺胆酸、原卟啉Ⅸ、4-Guanidinobutanoate及L-Palmitoylcarnitine 12个与大剂量赤芍改善ANIT所致大鼠淤胆型肝炎相关的特征代谢标志物;特征代谢标志物分别涉及D-精氨酸与鸟氨酸代谢、牛磺酸与亚牛磺酸代谢、苯丙氨酸代谢、泛酸酯与辅酶A生物合成、初级胆汁酸生物合成、赖氨酸降解、精氨酸与脯氨酸代谢、卟啉代谢等多条信号通路。②从网络药理学的层面,明确了赤芍治疗淤胆型肝炎涉及T细胞受体信号通路、Toll样受体信号通路、NOD样受体信号通路等多条通路,在淤胆型肝炎的特异治疗方剂赤丹退黄方中占有重要的作用,并进一步证实了Akt与NF-κB是赤芍发挥治疗作用的关键调控蛋白。(5)基于临床的重用赤芍治疗淤胆型肝炎代谢组学研究:①采用自身前后对照临床试验发现,重用赤芍可显著改善患者血清TBIL、DBIL、ALT、AST(P<0.05),无明显的不良反应。②通过代谢组学技术,共鉴定出全反式脱氢视黄醛、胆红素二葡糖苷酸、甘氨鹅脱氧胆酸、胆红素葡糖苷酸、甘氨胆酸、L-缬氨酸及甘氨脱氧胆酸7个与重用赤芍治疗作用相关特征代谢标志物,并在一定程度映证了动物的代谢组学研究结果。结论:①循证药学研究结果显示:赤芍治疗淤胆型肝炎与重度黄疸方剂中的用量在25-150 g/60kg·d范围内联用或单用,其有效率均高于西药常规疗法。②基础实验结果提示:赤芍中所含的芍药苷类成分是其主要效应成分,赤芍在20-80 g/kg的剂量范围能有效改善淤胆型肝炎模型大鼠异常的生物学指标,且呈量效关系;其机制主要通过提高抗氧化应激Akt-Nrf2-GSH通路,降低炎性反应信号NF-κB-NLRP3炎性小体,调节摄入与排出转运蛋白BSEP、MRP2、NTCP实现;还可能通过影响胆汁酸的组成与代谢通路及T细胞受体、Toll样受体、NOD样受体等信号通路网络实现综合的网络调节。③前瞻性临床研究结果提示:用赤芍300 g/60kg·d治疗淤胆型肝炎,鉴定并检出甘氨胆酸与甘氨鹅脱氧胆酸,其可作为潜在的预后标志物。本研究结果初步阐明了重用赤芍治疗淤胆型肝炎的科学内涵与剂量特点,为重用赤芍的临床应用提供理论依据。