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目的复制20 m J/cm2的UVB诱导的Ha Ca T细胞凋亡模型,从溶酶体组织蛋白酶B(Cathepsin B,Cat B)/Bid/Bax/线粒体细胞色素c(Cytochrome c,Cyt c)的角度,研究扇贝多肽(Polypeptide from Chlamys farreri,PCF)抑制UVB辐射诱导的Ha Ca T细胞凋亡的分子机制。方法建立20 m J/cm2的UVB诱导Ha Ca T细胞凋亡模型。实验设计组别:对照组、UVB模型组、UVB+1.42 mmol/L PCF组、UVB+2.84 mmol/L PCF组、UVB+5.69 mmol/L PCF组、UVB+5.68 mmol/L Vc阳性对照组、Control si RNA组、Bid-si RNA组、Bax-si RNA组和Cat B抑制剂CA-074Me(10mmol/L)组。以Hoechst 33258荧光染色法检测UVB辐射后18h细胞凋亡率,RT-PCR检测Cat B、Bid、Bax m RNA在UVB辐射后0、3、6、12、18、24h的经时表达变化,RT-PCR和Western blot分别检测PCF对Cat B、Bid、Bax m RNA和蛋白表达高峰点的保护作用;预先加入抑制剂CA-074Me及分别采用脂质体Bid-si RNA、Bax-si RNA瞬时转染Ha Ca T细胞,Western blot检测Cat B、Bid、Bax、Cyt c蛋白表达高峰点的变化。采用SPSS17.0软件进行单因素方差分析。结果UVB辐射后细胞出现典型的细胞凋亡形态,凋亡率达35.9%;与模型组相比,PCF可浓度依赖性地降低细胞凋亡率(P<0.05)。Cat B m RNA的经时表达显示UVB辐射Ha Ca T细胞后3h达到高峰(P<0.05);Bid m RNA的经时表达显示UVB辐射Ha Ca T细胞后呈现两次高峰,分别在3h和18h(P<0.05);Bax m RNA的经时表达显示UVB辐射Ha Ca T细胞后6h达到高峰(P<0.05)。RT-PCR检测结果表明,与模型组相比,不同浓度的PCF和Vc能明显下调Cat B、Bid和Bax m RNA的表达(P<0.05)。Bid蛋白检测结果表明Bid可被剪切为t-Bid形式;PCF和Vc能明显降低Cat B、t-Bid和Bax蛋白的表达(P<0.05)。加入抑制剂CA-074Me后较模型组相比能明显减少Cat B、t-Bid、Bax的蛋白表达水平及线粒体Cyt c的释放(P<0.05);Bid表达被沉默后较模型组相比能明显下调Bax蛋白表达水平和线粒体Cyt c的释放(P<0.05),而Cat B蛋白表达无明显改变(P>0.05);Bax表达被沉默后,较模型组相比蛋白表达显示Cat B、t-Bid表达无明显改变(P>0.05),但Cyt c释放明显减少(P<0.05)。结论20 m J/cm2的UVB诱导的Ha Ca T细胞凋亡与Cathepsin B/Bid/Bax/Cyt c信号通路有关,PCF可以通过阻断该信号通路中信号分子的表达保护Ha Ca T细胞免受损伤。