本论文主要目的是研究第三代新型电化学生物传感器的构造及优化,将新材料结合适当的方法构造出新颖的电化学生物传感界面,探究酶和蛋白质在其表面的电化学性质。在此基础上,本文采用多种类型的电极材料,对细胞色素C (Cyt c)的固定化方法进行了探索,构造了两种性能良好的电化学生物传感器,并对其进行了表征及电化学测试。具体内容如下：利用海藻酸钠(SA)的成膜性质和聚乙二醇(PEG)的致孔作用制备了海藻酸钙(CA)三维多孔膜,将Cyt c固定于此复合膜修饰电极上成功制备了一种电化学生物传感器。制备过程为：先在玻碳电极上涂布SA和PEG的混合溶液,再喷涂CaC12溶液进行交联成膜,制得CA多孔膜,然后涂Cyt c,晾干即得Cyt c-CA多孔膜。通过扫描电子显微镜(SEM)、紫外-可见吸收光谱(1UV-vis)、循环伏安(CV)、方波伏安(SWV)、计时安培法等方法分别对所得复合膜进行表征和性能测定。紫外光谱表明Cyt c在CA三维多孔膜中仍保持其原有的二级结构。循环伏安曲线中-0.352V(vs SCE)处表现出了蛋白质血红素FeⅢ/Ⅱ电对的可逆氧化还原峰。通过方波伏安法对数据拟合获得了氧化还原的式电势(E’)和表观异相电子传递速率常数(Ks)。Cyt c-CA多孔膜修饰电极对O2、H2O2、NaNO2和TCA也都表现出了良好的电催化性能。此外,本文还利用正电性的聚乙烯亚胺(PEI)制备了Cyt c-CA-PEI复合膜,增加了CA凝胶结构的机械性能和含水率。该膜修饰电极也表现出良好的电化学性质。实验结果表明,这两种方法制备的电化学生物传感器都具有较高的灵敏性、良好的稳定性和较好的生物催化活性。