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食物过敏在世界范围内呈现逐年上升趋势,常引发其它过敏性疾病,严重影响人们健康水平和生活质量,已经成为一个严峻的公共健康问题。近年来,应用益生菌预防和治疗食物过敏已成为过敏性疾病领域的研究热点。本研究采用牛乳蛋白为过敏原建立食物过敏动物模型,以过敏小鼠机体Th1/Th2平衡及调节性T(Regulatory T,Treg)细胞亚群数量变化为指标全面分析了益生菌对小鼠牛乳蛋白过敏的缓解作用,重点研究了益生菌在缓解食物过敏反应中对树突状细胞(Dendritic cells,DCs)成熟、分化和功能的调节作用,并深入探讨了 DCs表面受体、相关信号通路以及活性因子在益生菌调节DCs功能过程中的作用。本研究结果将为益生菌抗过敏活性的分子机制提供有力证据,也为抗过敏功能益生菌的应用提供可靠依据。主要研究结果和结论如下:利用细胞和动物模型,评价了益生菌对小鼠牛乳蛋白过敏反应的缓解作用,发现副干酪乳杆菌L9(L9)可以显著降低过敏小鼠血清中组胺、肥大细胞蛋白酶水平和总IgE浓度,分别减少25.4%、31.9%和27.6%。L9减少过敏小鼠血清及脾脏淋巴细胞中Th2型细胞因子IL-4水平(30.6%和36.6%),并显著提高血清及脾脏淋巴细胞中Th1型细胞因子IFN-γ含量(p<0.05)。结果证明L9具有缓解小鼠牛乳蛋白过敏作用,与其调节小鼠体内的Th1/Th2平衡有关。为明确Treg细胞是否参与L9对过敏小鼠体内Th1/Th2平衡的调节过程,本研究提取、分离小鼠肠组织淋巴结和脾脏中淋巴细胞,并进行体外培养。结果显示,与过敏组小鼠相比,L9可以显著提高小鼠肠组织淋巴结和脾脏淋巴细胞中Foxp3+Treg和IL-10+Treg细胞数量,在MLN中两类Treg细胞的增加幅度达到50%以上。此外,L9显著增加血清和淋巴细胞上清中TGF-β和IL-10水平(p<0.05),同时L9组小鼠PP、MLN和脾淋巴细胞上清中IL4水平分别下降45.8%、47.2%和32.6%,IFN-γ水平也显著提高(p<0.05)。结果表明,L9可以通过提高Foxp3+Treg和IL-10+Treg细胞数量和调节性细胞因子的分泌,调节牛乳蛋白过敏小鼠体内的Th1/Th2失衡。为探讨DCs在L9促进Treg细胞分化过程的作用,本研究分析了各组小鼠体内DCs亚型的变化,并从L9组小鼠肠组织中分选出CD103+DC和CX3CR1+DC,分别与过敏小鼠CD4+T细胞体外培养。结果显示,与过敏组相比,CD103+DC数量在L9组小鼠PP、MLN和脾脏中分别增加47.7%、34.7%和26.4%,CX3CR1+DC的数量在L9组小鼠PP、MLN和脾脏中分别增加62.7%、1 18.4%和28.9%。体外培养发现,对比过敏组,L9组的CD103+DC可分泌高水平的TGF-β和IL-10,显著提高CD4+T细胞中Foxp3+Treg和IL-10+Treg细胞比例(118.1%和56.4%);而L9组CX3CR1+DC分泌高水平的1L-10,提高CD4+T细胞中IL-10+Treg比例108.4%。本研究表明L9可以通过调节CD103+DC和CX3CR1+DC数量和功能提高牛乳蛋白过敏小鼠体内Treg细胞数量。为了明确L9激活DCs功能的信号转导途径,本研究利用小鼠骨髓源树突状细胞(BMDCs),利用Western blot技术分析了 L9对BMDCs中TLR2/MAPK信号通路的激活作用,结合通路抑制剂和siRNA基因沉默手段分析了 TLR2/MAPK信号通路在L9调节BMDCs功能过程中的作用。结果显示,L9可以促进BMDCs表面TLR2的表达和下游MAPK信号通路的磷酸化,显著提高BMDCs 中 CD103+DC 和 CX3CR1+DC 比例(p<0.05),细胞因子 IL-10、IL-12 和 TGF-β 的分泌水平分别增加19.6倍、2.7倍和1.84倍,进而促进Treg细胞分化。BMDCs中MAPK信号通路的抑制和TLR2的基因沉默逆转了 L9对BMDCs分化和功能的促进作用。本研究证明了副干酪乳杆菌L9激活TLR2/MAPK信号通路,促进DCs向CD103+DC和CX3CR1+DC分化和调节性细胞因子的分泌,提高Foxp3+Treg和IL-10+Treg细胞数量,纠正过敏机体内的Th1/Th2失衡,缓解小鼠牛乳蛋白过敏症状。