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CCR4-NOT复合物在生物体中具有重要的作用,它参与细胞不同水平基因表达的调控过程中,在真核生物中高度保守。该复合物共有九个亚基构成,各自具有独特的生物学功能。CNOT9亚基在物种进化中表现出很高的保守性,具有臂状(ARM)重复结构单元,表面带有正电荷的凹槽能够结合寡聚核苷酸,但对poly(G)、poly(C)及poly(T)亲和性远远大于poly(A)。研究发现CNOT9在体外可以抑制CNOT7的脱腺苷酸化酶的活性,但两者之间并没有直接的相互作用,由此推测CNOT9发挥调控作用的机制可能与核苷酸的结合相关,但尚未得到CNOT9与寡聚核苷酸复合物的结构,无法深入探讨调控机制。
REGγ属于11S蛋白酶体激活因子同源蛋白之一,与另外两种同源蛋白REGα、β不同的是,它能够特异性的激活20S蛋白酶体降解碱性氨基酸残基形成的肽键。这一特异性暗示出REGγ具有独特的激活机制。此外,REGγ参与到多种细胞生命活动中例如细胞周期调控、细胞增殖、细胞凋亡等,在重大疾病发病机理中也发挥重要的作用。但现阶段,对REGγ独特的激活机制的认识仍十分有限,能够揭示其重要生理功能机理的结构基础比较匮乏。
本论文利用结构生物学手段,采用多种蛋白质分离纯化的方法,经过蛋白质结晶条件的筛选,获得高质量蛋白晶体。通过X射线衍射技术,解析得到了CNOT9-poly(G)、CNOT9-GMP复合物和REGγ-linker双突变体(K188E/D149A)的晶体结构,分辨率分别为2.3(A)、2.25(A)和2.45(A)。
CNOT9-poly(G)复合物结构显示在正电荷凹槽处存在底物的电子密度但无法确定其为DNA,暗示出核苷酸与CNOT9的结合可能是非特异性的;CNOT9-GMP复合物结构揭示出单个核苷酸与正电荷凹槽处的结合位点,并在晶体结构中观察到另外三处结合位点。通过多序列比对发现,结合位点处关键氨基酸残基高度保守,推测CNOT9与核苷酸结合的能力是进化过程中重要的保守的功能。
REGγ-linker双突变体(K188E/D149A)的晶体结构解析工作正在进行。