【摘 要】
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黑酵母(Black Yeast)是一类在细胞壁内外产黑色素的酵母状真菌,是迄今为止发现的最耐盐真核生物之一。黑酵母具有典型的细胞多形性,产黑色素、胞外多糖等特征,但这些因素是否
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黑酵母(Black Yeast)是一类在细胞壁内外产黑色素的酵母状真菌,是迄今为止发现的最耐盐真核生物之一。黑酵母具有典型的细胞多形性,产黑色素、胞外多糖等特征,但这些因素是否与其高耐盐的特性相关,目前还不清楚,同时具有上述特性的一种黑酵母出芽短梗霉(Aureobasidium pullulans)为研究这个科学问题提供了重要模型。本试验以一株分离于草莓果实的黑酵母:出芽短梗霉NG作为材料,检测在不同盐胁迫条件下的菌体生长状况、细胞分化表型、抗渗透应激积累物质等特征,并通过转录组学探究其耐盐性的分子生物学机制,结论如下:(1)出芽短梗霉通过细胞分化响应NaCl胁迫。盐胁迫条件下细胞分化为膨大细胞抵抗NaCl胁迫并通过多端出芽方式繁殖,在低盐浓度(<9%NaCl)时,细胞可以分化为菌丝体逃离不利环境。在高盐浓度时,细胞向耐盐性更强的膨大细胞、有横膈膜的膨大细胞和分生组织结构分化。(2)出芽短梗霉能通过积累甘油来抵抗高渗透胁迫,甘油积累量与NaCl浓度呈正相关。胞内积累甘油量随培养时间有波动性,波动程度跟NaCl浓度呈线性相关,细胞通过调节甘油积累消耗平衡细胞生长与盐胁迫适应。出芽短梗霉没有合成海藻糖用以抵抗渗透胁迫。(3)通过对7%盐胁迫处理与对照进行转录组测序分析,发现差异表达基因1558个,其中817个基因上调,741个基因下调,富集分析得到6个涉及盐胁迫响应的KEGG途径,其中甘油酯代谢途径(Glycerolipid metabolism)7个(4个上调,3个下调)差异基因、酵母MAPK激酶途径(MAPK signaling pathway-yeast)6个(1个上调,5个下调)、淀粉和糖类代谢途径(Starch and sucrose metabolism)17个(9个上调,8个下调)、精氨酸和脯氨酸代谢途径(Arginine and proline metabolism)9个(6个上调,3个下调)、色氨酸代谢途径(Tryptophan metabolism)13个(8个上调,5个下调)、甘氨酸、丝氨酸和苏氨酸的代谢(Glycine,serine and threonine metabolism)7个(4个上调,3个下调)。筛选出7个与甘油合成相关基因,其中4个基因上调,3个基因下调,这些基因与细胞能量代谢、物质合成都有紧密关联。
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