Cohen.S于1962年发现表皮生长因子(Epidermal Growth Factor,EGF),已有的研究表明EGF通过与其靶细胞膜上受体的结合,促进皮肤、角膜、肺和气管上皮组织等的增殖和分化；对表皮损伤和溃疡具有良好修复功能；临床上对肠、胃、肝等器官表面损伤的修复和再生也有显著疗效。因此在医疗、美容领域有非常广阔的应用前景。　　 本研究通过易错PCR和StEP的方法对EGF进行了定向进化,并从定向进化文库中筛选获得了一个EGF的突变体E40V,该突变体具有比hEGF更高的受体亲和性。为使获得的EGF突变体获得更好的应用价值,并深入的研究EGF结构与功能的相互关系,本课题根据EGF的特点选择毕赤酵母表达系统对EGF进行水溶性表达。将不带标签的E40V基因通过酵母表达载体pPICZαA在毕赤酵母GS115进行甲醇诱导表达,筛选获得一株目的蛋白表达量高的菌株pPICZαA-E40V-H/GS115,蛋白表达量为236mg/L。然后利用疏水层析纯化目的蛋白。在获得了较纯的目的蛋白后,以hEGF标准品作为对照,在细胞水平检测目的蛋白E40V的活性。首先通过细胞增殖实验发现,在作用浓度及时间维度E40V相对于hEGF标准品对正常细胞有更强的促增殖能力,另外,通过集落形成实验发现E40V不及hEGF对肿瘤细胞的促增殖能力。然后,借助划痕实验发现E40V比hEGF有更强的促进小鼠成纤维细胞迁移的能力,但是它们对肿瘤细胞的迁移能力的促进能力要显著弱于正常细胞。与此同时,利用毕赤酵母表达系统表达带有his-tag的E40V蛋白,借助金属螯合亲和层析方法纯化目的蛋白E40V-his,然后通过竞争性抑制ELISA分析了hEGF和E40V竞争性结合EGFR的情况,并评估了其IC50的关系,计算出E40V的IC50是野生型EGF的0.35倍。此外,通过双分子荧光互作实验证实了hEGF-EGFR,E40V-EGFR两者在活细胞体内的相互作用,其中荧光呈团状聚集分布,主要位于梭型细胞的一极或圆形细胞的近膜端区域,并且我们发现E40V-EGFR的作用要更强一些。