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第一部分华蟾素诱导骨肉瘤细胞凋亡及其可能机制实验研究[目的]：探讨华蟾素诱导骨肉瘤U20S细胞凋亡的效果及其可能机制。[方法]：将不同浓度华蟾素作用于骨肉瘤U20S细胞,MTT法被用来检测每组骨肉瘤细胞的生长抑制率,TUNEL染色法被用来观察细胞凋亡程度并计算其凋亡率,免疫荧光染色、RT-PCR、以及Western Blot被用来检测凋亡相关以及Wnt/β-catenin通路相关蛋白。[结果]：严格按照上述方法处理骨肉瘤U20S细胞后,MTT结果显示,随着华蟾素浓度和作用于细胞时间的增加,细胞生长抑制率明显增加,并呈时间-浓度依赖性关系。当华蟾素作用于骨肉瘤细胞不同时间后,细胞凋亡以及凋亡率随着作用时间的延长,其变化程度增加也更加明显。与作用于细胞24、48h相比,华蟾素处理细胞72h后细胞中凋亡相关蛋白bax的表达逐渐增加,而bcl-2逐渐减少,并且bax/bcl-2比值也增加明显(P<0.05)。Wnt/β-catenin通路相关蛋白β-catenin的表达量与华蟾素作用时间也呈正相关。[结论]：华蟾素能诱导骨肉瘤细胞凋亡,其效果呈浓度和时间依赖性,而其机制可能与激活Wnt/β-catenin通路有关。第二部分华蟾素联合化疗药物在骨肉瘤细胞中抗肿瘤作用的实验研究[目的]：探讨华蟾素联合化疗药物在骨肉瘤细胞中的抗肿瘤作用。[方法]：将实验分为四组,即对照组、华蟾素组、紫杉醇组、华蟾素+紫杉醇(联合组)。MTT法用来衡量各组骨肉瘤细胞的生长抑制情况,TUNEL染色用来观察细胞凋亡程度并计算其凋亡率,免疫荧光染色、RT-PCR、以及Western Blot用来检测凋亡相关以及’Wnt/β-catenin通路相关蛋白。[结果]：MTT试验结果显示,当不同组别药物作用于骨肉瘤U20S细胞后,华蟾素组细胞生长抑制率低于紫杉醇组,但联合组细胞生长抑制率明显增加。当华蟾素联合紫杉醇作用于骨肉瘤U20S细胞48h后,其凋亡率增加的程度较单独用药更加明显(P<0.05)。免疫荧光染色显示：在华蟾素、紫杉醇、以及二者联合用药分别作用于骨肉瘤细胞后,被测蛋白bax、β-catenin的荧光强度较对照组均有所增强,而bcl-2荧光强度有所减弱,但联合组上述蛋白荧光强度变化更明显。免疫荧光、RT-PCR、以及Western Blot结果显示：华蟾素、紫杉醇、及二者联合用药均能使bax、β-catenin表达增加,而使bcl-2表达减少,但联合用药对上调bax和β-catenin表达及下调bcl-2表达能力均强于单独用药(P<0.05)。[结论]：华蟾素联合紫杉醇对骨肉瘤具有明显的抗肿瘤效果,能促进bax和抑制bcl-2的表达,其机制可能与激活Wnt/β-catenin通路有关。