【摘 要】
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马立克氏病病毒的UL41基因与单纯疱疹病毒1型(Herpes simplex virus type1,HSV-1)的UL41同源,编码一种分子量约为50kDa的间质蛋白。以往研究表明,HSV-1 UL41蛋白不仅具有核酸
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马立克氏病病毒的UL41基因与单纯疱疹病毒1型(Herpes simplex virus type1,HSV-1)的UL41同源,编码一种分子量约为50kDa的间质蛋白。以往研究表明,HSV-1 UL41蛋白不仅具有核酸酶活性,而且在α疱疹病毒的发病机制和免疫逃避过程中发挥重要作用。为进一步研究MDV CVI988弱毒疫苗株的UL41蛋白是否参与逃避宿主免疫,首先对该基因进行了克隆、表达以及多抗的制备。一、MDV CVI988毒株UL41基因克隆与分析设计特异性引物,应用PCR方法从MDV CVI988株病毒感染的鸡胚成纤维细胞(CEF)总DNA中成功扩增出UL41基因基因。UL41基因序列分析表明,该基因在MDV-1中高度保守,核酸序列同源性在99.8%以上,氨基酸序列同源性在99.3%以上;并发现该基因中也具有和真核细胞核酸酶类似的XPG I结构域。二、MDV CVI988毒株UL41基因原核表达及其多抗研制利用原核表达载体pGEX-6P-1构建UL41基因与谷胱甘肽S转移酶(GST)融合表达子,命名为pGEX-UL41。pGEX-UL41经IPTG诱导后,通过SDS-PAGE电泳和Western blot证实UL41基因得到成功表达,其表达产物主要以包涵体的形式存在。利用电洗脱法成功获得融合目的蛋白,并以其蛋白为抗原免疫小鼠,制备了抗MDV CVI988毒株UL41蛋白特异性多克隆抗体。三、MDV CVI988毒株UL41基因杆状病毒真核表达通过将UL41基因ORF克隆到杆状病毒转座载体pFastBac1中,获得的重组质粒pFastBac1- UL41,并将其转化DH10Bac感受态细胞;通过蓝白斑筛选,PCR鉴定,获得重组杆状病毒rBacmid-UL41重组DNA。rBacmid-UL41重组DNA转染Sf9昆虫细胞,获得重组杆状病毒rBac-UL41。并利用原核表达产物免疫小鼠制备的多抗血清,通过间接免疫荧光试验(IFA)证明了MDV CVI988 UL41基因在昆虫细胞中的表达。
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