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棉蚜(Aphis gossypii Glover)是一种世界性的农业害虫,由于其世代历期短,繁殖力强,加之田间不合理的用药,导致我国田间棉蚜抗药性迅速发展且抗性背景相当复杂。昆虫细胞色素P450酶在昆虫代谢植物次生物质和杀虫剂中起非常重要的作用,因而能够使昆虫适应不同的寄主植物以及产生抗药性。本实验旨在筛选出与棉蚜对螺虫乙酯抗性相关的P450基因,并经RNA干扰(RNAi)进行初步功能验证。本研究以实验室选育获得的螺虫乙酯抗性棉蚜品系(SR)及敏感品系(SS)为研究对象,通过PBO的增效作用分析证明细胞色素P450与棉蚜对螺虫乙酯的抗性发展相关。通过分析棉蚜的转录组信息,鉴定出35个P450基因。由系统发育进化树可知这35个基因分别属于CYP2、CYP3、CYP4和Mito家族。实时荧光定量PCR测定了33个P450基因在SS和SR品系中的相对表达量,在若蚜中有5个P450基因在抗性品系中的相对表达量显著高于敏感品系,5个P450基因分别为CYP6CY4、CYP6CY14、CYP6CY18、CYP6DC1、CYP49A1。在成蚜中有3个P450基因在抗性品系中的相对表达量显著高于敏感品系,3个P450基因分别为CYP380C6、CYP353B1、CYP307A1。结合各基因的转录本丰度,筛选出最可能与抗性相关的基因CYP380C6。CYP380C6属于CYP4家族,而CYP4家族属于与抗药性相关的主要家族之一,因此被选择进行RNAi功能验证。通过人工饲料喂食dsRNA的方法进行RNAi,验证CYP380C6在棉蚜对螺虫乙酯抗性中的作用。人工饲料喂食dsRNA-CYP380C6后SR品系三龄若蚜体内CYP380C6的相对表达量被抑制了50.99%,SR品系无翅成蚜体内CYP380C6的相对表达量被抑制了73.86%。SR品系三龄若蚜对照组喂食dsRNA-ECFP(150ng/μL)和螺虫乙酯(50 mg/L),实验组喂食dsRNA-CYP380C6(150 ng/μL)和螺虫乙酯(50 mg/L);SR品系无翅成蚜对照组喂食dsRNA-ECFP(150 ng/μL)和螺虫乙酯(2500 mg/L),实验组喂食dsRNA-CYP380C6(150 ng/μL)和螺虫乙酯(2500 mg/L),适宜条件下饲养72h后,三龄若蚜对照组死亡率为65.84%,实验组死亡率为84.67%;无翅成蚜对照组死亡率为55.46%,实验组死亡率为93.59%。实验结果表明SR品系棉蚜在喂食dsRNA-CYP380C6后死亡率显著增加,这说明CYP380C6与棉蚜对螺虫乙酯的抗性相关。筛选出与棉蚜对螺虫乙酯抗性相关的P450基因,并初步验证其功能。为后续基因作用机制的进一步研究提供了一定的理论基础,为新农药的创制提供了可能的新靶点。