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目的:研究ΔNp63基因在5637细胞中的表达;研究抑制ΔNp63基因表达后膀胱移行细胞癌5637细胞侵袭、转移能力的变化;探讨ΔNp63基因在5637细胞侵袭、转移作用中的分子机制。方法:1)扩增并提取ΔNp63-shRNA质粒做序列鉴定,采用脂质体法介导ΔNp63-shRNA质粒转染膀胱移行细胞癌5637细胞,采用G418筛选出稳定表达ΔNp63-shRNA质粒的5637细胞,采用western blot检测干扰质粒转染前后5637细胞中ΔNp63蛋白的表达;2)采用同质粘附实验、异质粘附实验、transwell侵袭实验及细胞划痕实验检测5637细胞侵袭、迁移能力的变化,实验分为:空白组、阴性质粒组和干扰质粒组;3)ΔNp63基因在5637细胞侵袭、转移作用中的分子机制,运用激光共聚焦扫描显微镜及western blot实验检测在ΔNp63干扰前后5637细胞中ΔNp63蛋白与claudin-1蛋白表达的变化;采用实时荧光定量PCR检测在ΔNp63基因干扰前后5637细胞中ΔNp63 mRNA与claudin-1 mRNA表达的变化;探讨ΔNp63与claudin-1在细胞侵袭、转移中的相关性及可能的分子机制。结果:1)成功扩增、纯化ΔNp63-shRNA质粒,质粒序列检测鉴定证明ΔNp63-shRNA质粒序列与设计序列相吻合,采用脂质体介导ΔNp63-shRNA质粒转染5637细胞,在48h时的转染效率最佳,转染率为69.15±0.72%,通过G418(400μg/ml)筛选3周得到稳定表达ΔNp63-shRNA质粒的5637细胞,western blot实验显示干扰质粒组的ΔNp63蛋白表达与阴性质粒组及空白组比较明显降低(p<0.05),证明干扰质粒能有效抑制ΔNp63蛋白的表达;2)干扰质粒组同质粘附细胞数为2012.75±9.54,而空白组和阴性质粒组分别为1025.50±17.48和1020.25±20.25,干扰质粒组同质粘附细胞数高于阴性质粒组和空白组(p<0.05);异质粘附实验的干扰质粒组吸光度A值为0.295±0.008而空白组和阴性质粒组的吸光度A值分别为0.460±0.177和0.442±0.071干扰质粒组吸光度A值低于空白组和阴性质粒组(p<0.05);干扰质粒组的细胞穿膜数为9.5±2.0而空白组和阴性质粒组的细胞穿膜数分别为18.2±1.3和16.0±2.6,干扰质粒组的细胞穿膜数低于空白组和阴性质粒组(p<0.05);细胞迁移数在12h时改变不明显,干扰质粒组、空白组和阴性质粒组的细胞迁移数分别为18.60±0.61、20.00±0.27和19.50±0.51,三组间比较无明显统计学意义(p>0.05),而在24h后干扰组细胞迁移数为29.17±1.72,而空白组和阴性质粒组的细胞迁移数分别为53.83±1.60和51.50±1.87,干扰质粒组与空白组和阴性质粒组比较细胞迁移数出现明显降低(p<0.05);3)激光共聚焦显微镜扫描显示ΔNp63与claudin-1在5637细胞中均出现表达,ΔNp63主要集中在细胞核区域而claudin-1则在细胞膜周表达,ΔNp63-shRNA组的荧光表达弱于空白对照组;western blot实验显示ΔNp63-shRNA组中ΔNp63蛋白和claudin-1蛋白的表达与空白对照组比较明显降低;同时,实时荧光定量PCR显示ΔNp63-shRNA组的ΔNp63的mRNA和claudin-1的mRNA分别与空白对照组比较差异有统计学意义,且ΔNp63 mRNA的表达的抑制也降低了claudin-1 mRNA的表达。结论:1)成功扩增并提取了ΔNp63-shRNA质粒;2)ΔNp63-shRNA质粒成功转染5637细胞,并获得稳定表达ΔNp63-shRNA质粒的5637细胞株;3)ΔNp63基因表达的降低明显抑制了5637细胞的侵袭、转移能力;4)ΔNp63的mRNA和蛋白表达在转染ΔNp63-shRNA质粒的5637细胞中明显降低;5)ΔNp63的mRNA和蛋白表达降低导致了claudin-1的mRNA和蛋白表达降低,ΔNp63基因可能通过对claudin-1基因的影响而参与调控TCCB细胞的侵袭、转移。