松子蛋白调控Nrf2信号通路保护神经元作用及其机制研究

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目的:探讨松子蛋白保护神经元作用及机制。方法:(1)利用盐析法提取松子蛋白,利用SDS-PAGE检测松子蛋白的分子量范围,利用全自动氨基酸分析仪分析松子蛋白氨基酸组成与含量;(2)体外实验:利用过氧化氢(H2O2)建立SH-SY5Y细胞氧化损伤模型。分为空白对照组,模型对照组,松子蛋白低剂量给药组、松子蛋白中剂量给药组、松子蛋白高剂量给药组通过MTT比色法检测松子蛋白对SH-SY5Y细胞存活率的影响,利用流式细胞术检测松子蛋白对SH-SY5Y细胞凋亡的影响,利用Western blotting技术检测SH-SY5Y细胞内Bcl-2、Bax、Nrf2、HO-1、Keap1、Aβ1-42蛋白的表达水平,利用RT-PCR技术检测小鼠神经细胞中中Bcl-2、Bax、Nrf2、HO-1、Keap1基因的表达水平;(3)体内实验:选取ICR种小鼠,采用血管性痴呆模型小鼠,分为假手术对照组、模型对照组、阳性给药组、松子蛋白低剂量给药组、松子蛋白中剂量给药组、松子蛋白高剂量给药组,利用Morris水迷宫与跳台实验对小鼠进行行为学检测,采用SOD、MDA、GSH生化试剂盒检测松子蛋白对小鼠海马抗氧化能力影响,HE染色观察松子蛋白对小鼠海马神经元形态的影响,TUNEL染色法检测松子蛋白对小鼠海马神经元凋亡的影响,采用Western blotting技术检测小鼠脑组织中Bcl-2、Bax、Nrf2、HO-1、Keap1、Aβ1-42蛋白的表达水平。结果:(1)松子蛋白主要分布在3.314.4KDa和20.125KDa,松子蛋白含有7种必需氨基酸、10种非必需氨基酸;(2)松子蛋白能提高H2O2所致SH-SY5Y细胞损伤的存活率(P<0.05),抑制SH-SY5Y细胞的细胞凋亡(P<0.05);(3)松子蛋白能减少血管性痴呆模型小鼠逃避潜伏期和逃避路程(P<0.05),增加其脑组织中GSH和SOD的水平(P<0.05),降低脑组织中MDA的含量(P<0.05),松子蛋白能维持小鼠海马神经元的完整性和排列紧密度,抑制核固缩,减少小鼠海马区神经元的凋亡,体外与体内实验均证明松子蛋白可上调神经细胞内Nrf2、HO-1、Bcl-2蛋白的表达水平(P<0.05),下调神经细胞内Aβ1-42、Keap1和Bax蛋白的表达水平(P<0.05)。结论:松子蛋白可能通过促进Nrf2信号通路的传导,上调Nrf2、HO-1、Bcl-2的表达水平,下调Aβ1-42、Bax的表达水平,抑制氧化损伤和神经元的凋亡,从而起到神经元的保护作用。
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