目的：构建靶向小鼠鞘氨醇激酶-1（sphingosine kinase-1，SPK1）基因的RNA干扰（RNA interference，RNAi）载体并转染小鼠Lewis肺癌（Lewis lung cancer，LLC）细胞，观察其转染效果，为进一步探索SPK1与非小细胞肺癌之间的关系提供一种技术手段。方法：选取文献已证实有效的、针对小鼠SPK1基因的特异性小干扰RNA（smallinterfering RNA，siRNA）序列，根据上述序列人工合成模版序列，然后将其和双酶（Age I和EcoR I）切后的线性质粒载体连接，将连接后的产物转化到感受态细菌中，对在含抗生素的培养皿中长出的菌落进行PCR扩增，然后对其进行电泳及测序分析。通过转基因技术利用脂质体将其导入小鼠Lewis肺癌细胞中，荧光显微镜下观察绿色荧光、流式细胞仪检测其转染效率，免疫印迹检测SPK1蛋白的表达。结果：经酶切、测序验证，小鼠SPK1基因的siRNA真核表达载体构建成功；荧光显微镜下观察见转染后的小鼠LLC细胞中有较多带绿色荧光的细胞出现；流式细胞仪检测该载体转染小鼠LLC细胞的效率为79.5%；免疫印迹检测证实SPK1蛋白在转染后的小鼠Lewis肺癌细胞中表达下降。结论：成功构建以小鼠SPK1基因为靶标的siRNA表达载体，且有效下调小鼠Lewis肺癌细胞中SPK1蛋白的表达，为进一步研究SPK1与非小细胞肺癌之间的关系，奠定了实验基础。