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造血干细胞移植(HSCT)是治疗恶性血液病的有效方法，近年来脐血作为造血干细胞移植的来源之一，广泛应用于儿童患者中。但是CBT的植入慢，尤其是血小板的植入最慢，己成为临床血液学关注的焦点。另外，大剂量放化疗治疗恶性肿瘤可致骨髓抑制导致血小板显著减少而出血，其主要治疗手段为血小板输注。但反复输注不但增加了患者的经济负担，而且可因产生血小板抗体最终导致无效输注。因此，如何利用脐血造血干／祖细胞在体外进行巨核系的有效定向扩增分化，再将扩增产物输注人体，来弥补脐血移植的不足以及放化疗后骨髓抑制导致的血小板减少已成为目前研究的热点之一。
脐血巨核细胞体外扩增体系中的起始细胞主要有两种，一种为脐血CD34+细胞，另一种为脐血单个核细胞(MNC)。关于起始细胞应选择CD34+还是MNC细胞仍然存在着争议。目前国内外使用CD34+细胞进行巨核系定向诱导成熟的研究较多，而使用MNC进行诱导的研究较少。但也有学者认为，以脐血单个核细胞为扩增培养起始细胞经短期培养后其扩增效果优于分选的CD34+细胞。
本实验旨在通过本实验组已建立的人CB体外定向诱导扩增MK体系，对比脐血(CD34+，MNC)两种起始细胞诱导巨核细胞体外扩增的特点，探讨不同起始细胞的诱导效率，为实验及临床应用提供更有效的实验方法。
材料和方法
1.标本来源：
CB：来自本院及广州市脐血库健康足月妊娠产妇经产道或剖宫产分娩之胎儿脐静脉血。
2.实验方法：
2.1单个核细胞的分离：
采用：Ficoll-Hapaque分离法。
2.2 CD34+细胞的分选：
采用免疫磁珠分选法。
2.3巨核细胞的体外扩增：将收集到的脐血单个核细胞和CD34+细胞分别置于含有TPO、FL、IL．3、IL-6四种细胞因子的培养体系中诱导17天。其中：
1)细胞因子的终浓度：
TPO 20ng／ml，FL、IL-3、IL-6均为10ng／ml。
2)培养体系：
采用含10％FCS的IMDM。
2.4瑞氏-姬姆染色取不同时间点的细胞进行瑞氏-姬姆染色，在显微镜下观察细胞形态。
2.5细胞计数及流式细胞检测分别计数D0，7，10，14，17天的细胞总数及流式测定CD34+、CD41+细胞含量，计算CD41+细胞牛成的绝对值。
3.统计学处理
采用SPSS(13.0)软件包处理，进行两组或多组间one-way ANOVA Test。显著性差异为P<0.05。
结果：
1.以脐血单个核细胞为起始细胞的MK体外扩增MNC组中第7天、第10天、第14天、第17天的细胞总数分别为(1.40±0.08)x106、(2.02±0.11)x106、(2.70±0.03)x106、(2.74±0.10)x106，第7天、第10天、第14天的细胞总数具显著差异(P<0.01)，提示细胞总数随时间延长呈上升趋势。
MNC组中巨核细胞在第7天、第10天、第14天、第17天的含量分别为(4.44±0.84)％、(5.90±0.42)％、(5.18±0.50)％、(1.91±0.67)％，产生的巨核细胞数为(6.23±1.17)x104、(11.88±1.12)x104、(13.99±1.27)x104、(5.23±1.88)x1O4，各时间点细胞数有显著差异(P<0.05)，提示MNC组巨核细胞在第14天时增殖达到高峰，第17天时细胞含量显著下降。与CD34+细胞组结论一致。
2.以脐血MNC与CD34+为起始细胞的MK体外扩增特点的比较MNC组在第7天、第10天、第14天、第17天产巨核细胞的数目分别为(6.23±1.17)x104、(11.88±1.12)x104、(13.99±1.27)x104、(5.23±1.88)x104，CD34+细胞组生成的CD41+细胞分别为(7.07±0.25)x10+、(8.27±0.50)x104、(9.24±0.32)x1O4、(3.54±0.80)x104。在第10天、第14天时生成CD41+细胞的绝对值有显著差异(P<0.05)，结果提示，在第10天、第14天时，脐血单个核细胞诱导的巨核细胞产率高于CD34+细胞。
结论：
1.以脐血单个核细胞作为起始细胞体外扩增巨核细胞，在TPO+FL+FL-3+IL-6细胞培养体系中可以取得较好的扩增效果。
2.脐血单个核细胞诱导的巨核细胞在第14天达到增殖高峰，第17天CD41+细胞含量明显减少，CD41+细胞数迅速下降。与CD34+细胞诱导的巨核细胞体外扩增特点一致。提示脐血来源的巨核细胞体外诱导扩增在第14天时细胞数值最高。
3.以脐血单个核细胞与CD34+细胞作为起始细胞，在相同的培养体系中，第10天、第14天时MNC组产生的CD41+细胞高于CD34+细胞组，提示以脐血单个核细胞为起始细胞诱导巨核细胞的效率较高。
4.脐血单个核细胞可替代CD34+细胞作为体外扩增巨核细胞的起始细胞。