论文部分内容阅读
前言喉鳞状细胞癌(Laryngeal Squamous Cell Carcinoma,LSCC,喉癌)是头颈部常见的恶性肿瘤之一,是仅次于肺癌第二位的呼吸道高发肿瘤。在我国,东北地区是喉癌的高发区域,过去的10年中,我国喉癌的发病率呈现上升的趋势。喉癌对放疗及化疗均不敏感,手术是目前主要的治疗手段,但手术具有不小的损伤性,术后患者的生存率和生活质量均不理想。因此实现对喉癌的早期发现、早期诊断,并在基因水平寻找新的治疗手段成为当前急需解决的问题。恶性肿瘤的形成和转移是多基因、多因子共同作用的结果,涉及到多种癌基因的激活和抑癌基因的失活。肿瘤的发生及发展还与血管的形成有着密切的联系,目前已知有多种血管生成因子参与肿瘤血管形成。最近的一系列报道显示,产促红细胞生成素的肝细胞受体((?)rythropoietin(?)roducing(?)epatocelluar receptor,Eph)在肿瘤血管的生成中起着关键性的作用。Eph作为酪氨酸激酶受体家族中最大的一个亚家族,目前已确认的Eph家族成员共14个,根据结构同源性和结合特性分为A、B两个亚型,Eph的14个成员中,EphB4及其配体EphrinB2在肿瘤发生和演进中的作用已受到广泛的关注。材料与方法1.实验材料:40例标本来源于中国医科大学附属第一医院耳鼻喉科患者手术切取标本。病理结果证实均为喉鳞状细胞癌,术前未经化疗和放疗。2.实验方法:RT-PCR方法以癌旁组织为参照分析喉癌组织中EphB4基因mRNA的表达情况,Western blot方法分析EphB4蛋白质在喉癌组织中的表达情况,使用半定量PCR的方法检测肿瘤组织中该基因的扩增情况,PCR-LIS-SSCP技术结合DNA测序筛查了EphB4基因第13、14外显子(此区域编码蛋白质的酪氨酸激酶结构域)的突变情况。结果1.RT-PCR结果表明,40例配对标本,所有的癌组织中均有EphB4基因的表达,而在癌旁正常组织中仅呈现低表达或无表达。40例癌组织EphB4基因mRNA表达/β-actin表达的平均密度值比值为0.738±0.137,癌旁正常组织为0.450±0.173,40例配对标本中,29例癌组织EphB4基因mRNA表达高于癌旁正常组织,占72.5%(29/40)。经统计学分析,肿瘤组与对照组差异显著(t=7.77,P＜0.01)。2.Western blot结果表明,40例配对标本,所有的癌组织中均可见EphB4蛋白质的表达,而在癌旁正常组织中仅呈现低表达或无表达,癌组织EphB4蛋白质表达/β-actin表达的平均密度比值为0.757±0.174,癌旁正常组织EphB4蛋白质表达/β-actin表达的平均密度值为0.509±0.168,40例配对标本中,25例癌组织EphB4蛋白质表达高于配对的癌旁正常组织,占62.5%(25/40)。经统计学分析,肿瘤组与对照组差异显著(t=5.99,P＜0.01)。3.对40例样本的EphB4基因13、14号外显子突变筛查,仅有两例出现了泳动变位,通过DNA双向测序,未发现有碱基的改变。4.PCR结果显示,40例肿瘤组织中未发现EphB4基因的扩增。结论1.已检测的40对样本中未发现EphB4的扩增。2.筛查40对样本,EphB4基因的13、14号外显子中也未发现突变。3.喉癌组织中EphB4的mRNA和蛋白质表达水平均明显高于癌旁正常组织,且其高表达与肿瘤的临床分期、肿瘤直径的大小以及是否存在淋巴结转移密切相关。4.EphB4的mRNA和蛋白质的过表达可能与喉癌的发生、发展相关,其高表达与肿瘤的恶性变关系密切。