成肌细胞是中胚层来源的组织特异性细胞，有较强的自我更新能力，在出生后骨骼肌的损伤、修复和维持中起着重要的作用。随着成肌细胞作为自身成体种子细胞所展示的良好临床应用前景，寻求成肌细胞体外增殖和分化的调控因子显得日益重要。大量研究表明，睫状神经营养因子(Ciliary neurotrophic factor，CNTF)对多种类型的神经元起着营养、支持和保护作用，并可调节神经细胞的体外增殖和分化。近年来，CNTF改善骨骼肌肌力的体内作用亦有报道，但是由于它所具有的神经营养特性，使这种体内效应是否产生于CNTF对骨骼肌纤维的直接作用，尚无定论。 在本研究中，我们改进了传统的成肌细胞的分离技术，利用了新的成人成肌细胞快速高效分离方法。采用这种新方法，进行了成人成肌细胞的单克隆扩增。形态和免疫细胞化学分析显示，单克隆成肌细胞具有良好的均一性。并且，这些单克隆成肌细胞能以平均23.6±4.8h的倍增速度扩增，传代25代以上并保持其正常表型。因此，我们不仅建立了一种新的成人成肌细胞快速高效分离方法，并且提供了一个体外研究成人成肌细胞的良好培养体系，为研究外源性刺激因素对成人成肌细胞的体外影响及其机理奠定了实验基础。 我们将CNTF加到培养的单克隆成人成肌细胞低血清分化液中，观察了CNTF对成肌细胞体外分化的影响及p42/p44-MAPK信号通路在其中的作用。结果显示，不高于10ng/mL剂量的重组人CNTF能可逆地抑制成人成肌细胞的体外成肌分化，并且这种抑制作用具有剂量依赖性。伴随这种抑制作用产生的未分化成肌细胞，在形态和分子水平上与以前已定义的“储备细胞”(Reserve cells)相似。p42/p44-MAPK信号转导通路阻断剂PD098059，可取消CNTF的这种抑制作用。以上结果表明，CNTF能通过激活p42/p44-MAPK信号通路诱导“储备细胞”增加，从而抑制成人成肌细胞的体外分化。我们的研究揭示，CNTF可能是一种新的成人骨骼肌成肌细胞体外分化的负调节因子，它可通过ERK1/2信号通路诱导“储备细胞”增加抑制成人成肌细胞的体外分化，在肌萎缩和肌损伤的自体修复治疗中有重要的意义。 综上所述，在本课题研究中，我们利用一种新的成人成肌细胞快速高效分离方法，获得了表型均一、稳定的单克隆株系，提供了一个研究外源性因素对成人成肌细胞影响的良好培养体系。本研究中发现：1．较低浓度(<10ng/mL)的重组人CNTF是一种新的成人骨骼肌成肌细胞体外成肌分化的负调节因子，并可用于批量获取“储备细胞”。2.我们的结果首次揭示了，外源性rhCNTF可通过ERK1/2信号通路的激活，诱导“储备细胞”的增加，从而含量可逆性抑制成人成肌细胞的体外分化。这些发现对深入研究成人成肌细胞的分化调控机制，以及应用成年自体成肌细胞治疗包括帕金森病在内的多种临床退行性疾病有重要的意义。