【摘 要】
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目的应用RNAi技术沉默细胞信号转导子与转录活化子3(STAT3)基因,探讨其siRNA通过瘤内注射和腹腔注射两种途径对乳腺癌裸鼠移植瘤的影响。方法培养乳腺癌MCF-7细胞,于雌裸鼠背
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目的应用RNAi技术沉默细胞信号转导子与转录活化子3(STAT3)基因,探讨其siRNA通过瘤内注射和腹腔注射两种途径对乳腺癌裸鼠移植瘤的影响。方法培养乳腺癌MCF-7细胞,于雌裸鼠背部皮下种植,制作乳腺癌裸鼠移植瘤模型。待肿瘤长至一定大小时,随机分为瘤内注射对照组(A组)、腹腔注射对照组(B组)、瘤内注射组(C组)和腹腔注射组(D组),按质粒质量为20μg/0.2ml/只的剂量,以瘤内注射和腹腔注射的方式分别注射到C、D组的每只裸鼠,A、B组裸鼠按相应注射途径给予生理盐水。转染以后隔日观察肿瘤生长情况,当A组或B组肿瘤体积达到足够大(≥500mm3)时,处死A、B、C、D组所有裸鼠,取肿瘤,分别测其体积和重量,行免疫组化染色分析、Western Blot及RT-PCR检测STAT3表达情况,比较其组别之间的差异。结果将携带有STAT3的dsRNA质粒以两种不同途径导入裸鼠移植瘤细胞内,结果显示两组均出现瘤体生长明显抑制,差异与对照组存在统计学意义(P<0.05),但在两对照组及两实验组之间差异无统计学意义(P>0.05)。在蛋白质水平上分析,两实验组的STAT3蛋白表达下降(P<0.05),两实验组间差异无统计学意义(P>0.05)。从STAT3测定上分析,两实验组的STAT3灰度值下降(P<0.05),两实验组间差异无统计学意义(P>0.05)。在免疫组化分析中,两实验组瘤块出现明显的细胞坏死现象,且在瘤内注射组出现中心区STAT3呈阴性表达而周边显现为阳性表达现象。结论应用RNA干扰技术,通过瘤内注射和腹腔注射两种转染途径均可沉默STAT3基因,抑制其表达和肿瘤生长,但两种途径的转染效果之间差异无统计学意义。
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