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目的:观察择时应用二乙基亚硝胺对诱发大鼠肝癌易感性的影响,并从CYP2E1-ROS/NF-κB信号通路的动态变化,探讨其易感的机制,为原发性肝癌的预防提供实验依据。方法:雄性SD大鼠72只,体重165±15g,采用随机数字表法分为正常组、卯时组和酉时组,正常组12只、卯、酉两组各30只。卯、酉两组以DEN按50mg/kg的剂量腹腔注射,每周2次,连续4周后改为每周1次,至16周停止。卯时组选择5:00-7:00间注射;酉时组选择17:00-19:00间注射;正常组以生理盐水腹腔注射,注射剂量和次数同卯、酉两组。分别于造模第4、8、12周末3个时间点随机取正常组大鼠3只、卯、酉组各6只,16周末取剩余大鼠,收集大鼠的血清及肝脏样本,分别进行（1）大鼠血清ALT、AST、HA、γ-GT、SOD、GSH-Px、TGF-β1、MDA、AFP、8-OHdG、IL-6、TNF-α检测;（2）肝组织HE和Masson染色;（3）免疫组织化学法检测肝组织PCNA、CYP2E1、NF-κB-p65蛋白的表达;（4）实时荧光定量PCR检测肝组织CYP2E1、NF-κB-p65mRNA的表达。采用SPSS22.0统计软件对结果进行统计分析。结果:1、择时给予DEN对大鼠体重及肝脏系数的影响卯、酉两组大鼠体重从第4周末开始,均显著低于同期正常组大鼠（P<0.05）,随着时间的增长,体重增长缓慢,体重变化不明显（P>0.05）;卯、酉两组间差异不明显（P>0.05）。卯、酉两组大鼠肝脏系数从第4周末显著升高,均高于同时期正常组大鼠（P<0.05）,随着时间的增长,有显著的上升趋势（P<0.05）;大鼠肝脏系数在四个时间点内卯时组均低于酉时组,其中第16周末卯时组显著低于酉时组,差异有统计学意义（P<0.05）。2、择时给予DEN对大鼠肝脏形态及结节的影响正常组大鼠在整个实验过程肝组织完好,形态正常,未发现明显病变。第4和8周末时,卯、酉两组大鼠肝脏出现肝充血、肿胀的变化,比较两组肝脏系数,卯时组轻于酉时组,差异无统计学意义（P>0.05）。第12周末时卯时组有3只大鼠肝脏发生结节,有7个结节在1-3mm之间;酉时组有4只大鼠出现结节,有12个结节在1-3mm之间。第16周末时卯、酉两组所有大鼠的肝脏全部长有结节。其中卯时组大鼠肝脏结节有32个在1-3mm之间,有14个大于3mm;酉时组大鼠肝脏结节有51个在1-3mm之间,有24个结节大于3mm。3、择时给予DEN对大鼠肝脏HE染色的影响与正常组比较,卯、酉两组大鼠肝脏逐渐由肝细胞损伤、炎性浸润（4/8周）-肝胶原沉积、假小叶形成、结节硬化（8/12周）-癌细胞浸润、肝癌形成（16周）的变化过程。第12周末时,卯时组有3只大鼠发现肝硬化,硬化率是50.0%;酉时组有4只大鼠发现肝硬化,硬化率是66.7%,差异无统计学意义（P>0.05）。第16周末时,卯时组有4只大鼠发现癌变,癌变率为33.3%,酉时组有7只大鼠发现癌变,癌变率为58.6%,两组有显著差异（P<0.05）。4、择时给予DEN对大鼠血清ALT、AST、HA、γ-GT的影响卯、酉两组大鼠血清ALT、AST、HA、γ-GT于第4周末即显著升高,均高于同时期正常组大鼠（P<0.05）;随着时间的增长,存在显著的上升趋势（P<0.05）。与酉时组比较,卯时组血清ALT、AST、HA、γ-GT在4个时间点内均较低。其中在第16周末时卯时组血清γ-GT显著低于酉时组,差异有统计学意义（P<0.05）。5、择时给予DEN对大鼠肝PCNA蛋白、血清TGF-β1、AFP的影响卯、酉两组大鼠肝PCNA蛋白、血清TGF-β1、AFP分别于第4、8、12周末即显著升高,均高于同时期正常组大鼠（P<0.05）;随着时间的增长,存在显著的上升趋势（P<0.05）。与酉时组比较,卯时组肝组织PCNA、血清TGF-β1、AFP在4个时间点内均较低,但差异无统计学意义（P>0.05）;其中卯时组血清TGF-β1于第8周末才显著升高,酉时组于第4周末即显著升高。6、择时给予DEN对大鼠肝CYP2E1蛋白及mRNA表达的影响卯、酉两组大鼠肝CYP2E1蛋白及mRNA的表达于第4周末即显著升高,均高于同时期正常组大鼠（P<0.05）;随着时间的增长,存在显著的上升趋势,（P<0.05）。与酉时组比较,卯时组肝CYP2E1蛋白及mRNA的表达在4个时间点内均较低。其中卯时组CYP2E1mRNA表达于第12周末开始显著低于同时期的酉时组,差异有统计学意义（P<0.05）;卯时组CYP2E1蛋白表达于第16周末时显著低于同时期的酉时组,差异有统计学意义（P<0.05）。7、择时给予DEN对大鼠肝ROS、血清MDA、8-OHdG、SOD、GSH-Px的影响卯、酉两组大鼠肝ROS、血清MDA、8-OHdG于第4周末即显著升高,均高于同时期正常组大鼠（P<0.05）,随着时间的增长,存在显著的上升趋势（P<0.05）。与酉时组比较,卯时组肝组织ROS、血清MDA、8-OHdG在4个时间点内均较低;其中在第12、16周末时卯时组肝组织ROS明显低于酉时组,差异有统计学意义（P<0.05）。卯、酉两组大鼠血清SOD、GSH-Px于第4周末即显著降低,均显著低于同时期正常组大鼠（P<0.05）;但随着时间增长,SOD、GSH-Px变化不明显（P>0.05）。与酉时组比较,卯时组血清SOD、GSH-Px在4个时间点内均略高,但差异无统计学意义（P>0.05）。8、择时给予DEN对大鼠肝NF-κB-p65蛋白及mRNA表达的影响卯、酉两组大鼠肝NF-κB-P65蛋白及mRNA的表达于第4周末即显著升高,均高于同时期正常组大鼠（P<0.05）;随着时间的增长,存在显著的上升趋势,（P<0.05）。与酉时组比较,卯时组肝组织NF-κB-P65蛋白和mRNA的表达在4个时间点均较低,但差异无统计学意义（P>0.05）。9、择时给予DEN对大鼠血清IL-6、TNF-α的影响卯、酉两组两组大鼠血清IL-6、TNF-α分别于第4、8周末即显著升高,均高于同时期正常组大鼠（P<0.05）;随着时间的增长,存在显著的上升趋势（P<0.05）,与酉时组比较,卯时组血清IL-6、TNF-α在4个时间点内均略低,但差异无统计学意义（P>0.05）。结论:1、不同时间应用二乙基亚硝胺对诱导大鼠肝癌的易感性不同。2、择时给予二乙基亚硝胺对诱导大鼠肝癌易感性的差异,可能与对CYP2E1-ROS/NF-κB信号通路激活的程度不同有关。3、提示日常生活中,可以通过调整食用含有亚硝酸盐食物的时间,或使用抗氧化物质,降低亚硝胺对肝脏的损伤,积极预防肝癌的发生。