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【研究目的】目前循环肿瘤细胞(circulating tumor cell,CTC)的检测方法多受限于特异性或者准确的细胞表面标记,由于这些特异的细胞表面标记只在很小的一部分细胞群体中表达,因此,通过这类方法检测到的CTC只占血液中循环的肿瘤细胞的很小一部分。在这篇文章中,我们发明了一种全新的CTC检测技术,该技术是基于检测肿瘤细胞所共有的生物特性,即细胞核浆比,而不是生物标记,如EpCAM等,因此,可以检测到更大的CTC群体,提升CTC检测的灵敏度,使检测效果具有更高的稳定性。【研究方法】首先,我们用量化成像流式Flow Sight检测肝癌患者外周血中的循环细胞,发现了一个特殊的单核细胞群体,这个细胞群体为CD45-的细胞,并且相较于其他细胞,具有更高的细胞核浆比,具有分裂能力。我们认为其为循环肿瘤细胞,并且定义为高核浆比细胞(high karyoplasmic ratios,HKR cells)。随后,我们用10例HCC伴发镜下癌栓(microvascular invasion,MVI)的病人、5例正常人的外周血进行进一步检测,以此来建立外周血HKR细胞数目与镜下癌栓出现之间的量化关系,为了增加实验的准确性,同时标记了CD45,EpCAM,DAPI标记。然后,我们随机选取了12例正常人,12例非肝癌病人(肝硬化等),52例肝癌病人(18例MVI0期的病人,18例MVI1期的病人,16例MVI2期的病人)的外周血进一步检测建立的量化关系,并以此来确立应用外周血中HKR细胞数目来预测MVI出现的模型。并且,利用受试者工作特征曲线(Reciever Operation Curves,ROC)评价了HKR细胞数目诊断MVI出现和诊断肝癌发生的灵敏度和特异度,同时,我们对入组的肿瘤病人进行了最长为期一年的术后随访,以确定我们所建立的方法在判断肿瘤预后方面的临床意义。最后,我们随机选取了42名随机病人和52名肝癌病人的外周血,来进一步检测我们所建立模型的准确性。【实验结果】在肝癌病人中,运用我们的方法检测到的外周血HKR细胞数目有56.2±23.8个/100,000个单核细胞,该值远大于非肿瘤组的病人(7.6±1.2/100,000)。在肝癌病人中,伴发MVI和不伴发MVI的病人,外周血中检测到的HKR细胞的数目也是有显著差异。通过受试者工作特征曲线分析得知,阈值是21.8/100,000,曲线下面积大于传统的检测方法(比如依赖CD45和EpCAM标记法)。这些结果表明这种新型的CTC检测技术相对于传统的方法,具有更高的敏感性和可靠性。【结论】在这项研究中,基于外周血CTCs的核浆比,我们开发了一种利用成像流式细胞仪,检测量化外周血中CTCs的方法,并对这一方法进行了验证。该技术方法依赖于检测所有肿瘤细胞所共有的细胞形态学特征-核浆比,而不是依赖特异性抗体或特异的细胞表面标志物,相比于传统的依赖细胞表面标记的CTCs检测技术,其具有更高的灵敏度,这表明它是CTC的检测和监测的一种更有效的方法。