论文部分内容阅读
溶酶体在机体防御外来入侵物质、营养吸收、回收衰老损坏细胞器、胞内信号调控等多个方面都发挥着重要作用,多种疾病的发生被认为与溶酶体功能缺陷相关,比如阿兹海默症及糖原贮积症。Vps18蛋白是组成C类Vps蛋白复合物的四个亚基之一,在溶酶体的多种形成途径中扮演着重要的角色。我们之前的研究发现,在小鼠神经细胞中使用Nestin-Cre转基因条件性剔除Vps18基因会导致神经细胞大规模凋亡,阻碍神经前体细胞的迁移,并导致突变体小鼠在围产期内全部夭折。此外,乳鼠小脑切片的病理学检测发现,浦肯野细胞的树突发育也受到了抑制。然而由于Vps18F/F;Nestin-Cre小鼠过早夭折,我们无法了解Vps18基因对于出生后浦肯野细胞的发育及行为学上的影响。因此,为了研究Vps18对小鼠运动神经的发育的影响,我们使用Pcp2-Cre转基因在小脑浦肯野细胞中特异性剔除Vps18基因。我们发现Pcp2-Cre小鼠是可以长期生存并是可育的,但行为学上表现出类似于小脑共济失调的表型。然而在三月龄的成年Vps18突变小鼠小脑中,浦肯野细胞的树突发育则未见与野生型小鼠有明显差别。这表明了Vps18可能只在浦肯野细胞发育早期发挥作用。此外,我们发现Lox蛋白在突变小鼠小脑中沉积,这很可能是导致浦肯野细胞凋亡的原因之一。我们的研究揭示了Vps18蛋白在小脑浦肯野细胞树突发育过程中的重要作用,为研究人类神经退行性疾病,尤其是小脑共济失调提供了新方向与思路。溶酶体在维持机体正常生理功能中起着不可或缺的作用,但其在癌症发生发展中的作用尚不明确。Vps18基因是介导溶酶体成熟的关键蛋白,我们的研究发现,利用带有Cre重组酶的腺病毒(Adeno-Cre)在Vps18F/F小鼠肺中条件剔除Vps18基因并不会引起癌症,但在LSL-K-rasG12D小鼠肺中条件性剔除Vps18基因则会导致肺癌病灶显著增多增大。TUNEL分析和Caspase3蛋白免疫印迹实验显示,Vps18蛋白缺失未影响肿瘤细胞的凋亡,但EdU标记实验显示肿瘤细胞的增殖增强。蛋白免疫印迹检测发现,Vps18缺失的LSL-K-raSG12D小鼠肺癌病灶中表皮生长因子受体(EGFR)明显积累,且EGFR下游的Stat3转录因子的磷酸化水平显著增强,而这很可能是由于Vps18基因缺失阻断了内吞泡与溶酶体融合而导致的。我们的结果揭示了Vps18基因在肺癌发生发展中的重要作用,为研究溶酶体在癌症中的作用提供了宝贵思路与线索。