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草本植物野菊的药物应用价值已具有几百年的历史记载,含消炎、抗氧化及免疫调节等成分。野菊花黄色,抗逆性强,易于繁殖,在园林中具有较高的应用价值。基因工程研究对改良观赏植物野菊的观赏及品质性状,培育优良的野菊新品种具有十分重要的意义。MYB转录因子对植物的生物进程起重要的调控作用,本研究欲探究野菊MYB转录因子在其生长发育进程中的作用,通过转基因方法使ChiMYB在烟草中过量表达,来研究ChiMYB基因的调控潜能。本研究以野菊(Chrysanthemum indicum)为实验材料,利用本实验室前期已获得的特异性引物克隆野菊MYB基因,并对其进行生物信息学分析;构建过表达植物载体,转化烟草;测定转ChiMYB基因烟草的表型和光合特性,初步探究了ChiMYB基因能够抑制光合通路上光合酶及光合色素基因表达,使相关酶及色素合成受阻,导致净光合速率下降,即ChiMYB基因具有转录抑制因子的功能。以期更好的发挥野菊的多途径利用价值及改善野菊品质,同时也为野菊分子育种奠定基础。研究结果如下:1.以野菊实生苗叶片总RNA为模板,通过RT-PCR方法扩增得到一个MYB类转录因子基因,将其命名为ChiMYB,利用生物信息学方法对ChiMYB基因编码的氨基酸序列进行分析,结果表明:MYB基因全长为1194bp,ORF为948bp,编码315个氨基酸;该基因所编码氨基酸序列属于SANT超家族,含SANT结构域,行使DNA结合结构域的功能,且分析结果显示ChiMYB基因可能具有转录抑制因子的功能;系统进化树分析显示,野菊的ChiMYB与菊花和神农香菊的MYB同源性较高,次之是与菊科菜蓟的同源域蛋白同源性较高。2.在已获得野菊ChiMYB基因全长的基础上,构建克隆载体;利用双元表达载体pBI-121上的XbaI和SpeI两个酶切位点,双酶切构建pBI121-MYB植物表达载体;利用电转化法成功将pBI121-MYB重组质粒和pBI121空载体质粒导入农杆菌EHA105中;农杆菌介导法将ChiMYB基因和pBI121转入烟草植株体内,通过抗性筛选和抗性植株DNA的PCR检测,证明已成功过获得多个转ChiMYB基因和转pBI121空载体的阳性株系,共选出3个转ChiMYB基因株系和1个转pBI121株系。3.对转ChiMYB基因烟草与对照WT、EV进行外观及光合特性测定,初步探究ChiMYB基因功能。研究结果发现,转ChiMYB基因烟草与对照WT、EV相比,在表型及光合特性上有一系列变化:转ChiMYB基因烟草三个株系L1、L2、L3与WT、EV比较,叶片黄化,且叶面积显著下降,茎发生了横向弯曲,且萌蘖出侧芽;转基因烟草三个株系L1、L2、L3较WT、EV的最大净光合速率、气孔导度、蒸腾速率及表观量子效率显著下降;绿素a、叶绿素b、总叶绿素和类胡萝卜素含量下降显著,其平均值分别仅为WT和EV的53.8%、46.5%、52.1%、49.1%和47.6%、46.1%、47.2%、48.5%,叶绿素a/b差异不显著;叶绿素荧光参数中只有非光化学猝灭系数显著下降,其平均值较WT和EV分别降低了23.8%和23.3%,光化学猝灭系数下降但差异不显著,初始荧光、最大荧光、PSII最大光化学效率,PSII实际光化学效率与WT和EV没有显著差异。