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目的:在成功构建egG1Y162-1与egG1Y162-2重组蛋白,并确定其具有良好的抗原性与免疫原性的基础上,将疫苗egG1Y162-1与egG1Y162-2免疫BALB/c小鼠,并用细粒棘球原头呦攻击感染,研究免疫保护作用及其作用机制,为包虫病疫苗的研制提供新的候选分子。方法:(1)动物动物分组方案:选取140只小鼠随机分为A实验组(egG1Y162-1组)、B实验组(egG1Y162-2组)和C对照组(佐剂组)、D对照组(生理盐水对照组),分别对其进行肢下注射egG1Y162-1、egG1 Y162-2、生理盐水+佐剂和生理盐水,之后进行三次加强免疫。4组均于末次免疫后两周(即第8W)用1000只细粒棘球蚴的原头蚴腹腔攻击感染。在第30w剖杀各组剩余小鼠,分离并称重细粒棘球坳囊,计算囊重抑制率。免疫保护力计算,免疫保护力计算公式:囊重抑制率=1-实验组平均包囊湿重/对照组平均包囊湿重×100%。对小鼠的免疫保护机制进行研究,体液免疫指标抗体水平的测定:从开始按不同的时间点0W(第一次免疫前)、2W(第二次免疫前)、4W(第三次免疫前)、6W(第四次免疫前)、8W(免疫后/感染前)、30W(感染后),分别对各组小鼠采血,检验血清IgG、IgG1、IgG2a、IgG2b和IgE水平的变化;细胞免疫指标细胞因子水平的检测:在0W、8W、30W,分别分组对小鼠采血,进行血清细胞因子IL-2、IFN-γ、TNF-a、IL-4和IL-10的监测;用FCM检测小鼠感染后30W脾细胞CD4+和CD8+、亚群的变化,并检测CD4+CD25+T reg细胞、CD4+CD25+Foxp3+T reg细胞的改变。用CCK-8法检测小鼠8W和30W脾细胞增殖水平的改变;通过采用Annexin V-FITC试剂盒检测30W时脾细胞原液或用Con A刺激培养时细胞凋亡发生率。结果:(1)egGIY162-1、egG1Y162-2疫苗均可以诱导小鼠产生明显免疫保护力。(2)采集血清进行ELISA试验检测血清中抗体IgG、IgG1、IgG2a、IgG2b和IgE的变化,结果表明IgG、IgG1、IgG2a、IgG2b和IgE在免疫后实验组不同程度的上升,与对照组相比具有统计学意义。其中IgG、IgG2a、lgG2b和IgE在免疫后8达到最高水平,在感染后期下降;而 IgG1在免疫后升高后在感染后期达到最好水平。血清细胞因子IL-2、IFN-y、TNF-α、IL-4和IL-10的检测结果显示,IL-2和TNF-αα水平在第8W(免疫后)达到最高水平,在第30W(感染后)下降;IFN-γ、IL-4和IL-10在第8W(免疫后)出现增高趋势,在第30W(感染后)达到峰值。实验组与对照组差异均有统计学意义。FCM结果显示在第30W(感染后)实验组脾细胞CD4+和CD8+亚群出现明显升高,CD4+CD25+Treg水平降低。用CCK-8法检测小鼠8W(免疫后)和30W(感染后)显示疫苗组小鼠脾细胞增值情况均高于对照组,同组ConA刺激后增殖又高于疫苗刺激组,感染后同组同样刺激条件下脾细胞增殖水平出现下降。AnnexinV-FITC试剂盒检测脾细胞凋亡发生率,显示egG1Y162-1、egG1Y162-2疫苗组凋亡率低于对照组,而佐剂对照组和生理盐水对照组之间无明显差异。结论:egG1Y162-1与egG1Y162-2为极具应用潜质的疫苗候选分子。对疫苗egG1Y162-1与egG1Y162-2产生的免疫保护性可能机制有,抗体介导的体液免疫,IgG及其亚类IgG2a、IgG2b和IgE介导的体液免疫,在抗细粒棘球蚴感染过程中发挥重要作用;细胞免疫中,细胞因子水平变化显示Th1类免疫应答在疫苗免疫组的保护中占优势作用,有利于机体抵御细粒棘球呦的感染;疫苗egG1Y162-1与egG1Y162-2可诱导感染小鼠增强CD4+T的免疫应答作用,同时可以降低CD4+CD25+T reg的免疫抑制效应;疫苗egG1Y162-1与egG1Y162-2可通过增强感染小鼠的脾T淋巴细胞增殖能力,降低其凋亡抑制率,整体上提高脾T淋巴细胞的免疫功能。该疫苗候选分子的注入使得免疫抑制机制得到了有效地阻遏,有利于机体的抗寄生虫。