研究背景：诱导细胞死亡的DFF45样效应因子b蛋白（cell death-inducing DFF45-like effector,Cideb）是20世纪末发现的CIDE家族的重要成员，尽管最初被认为与细胞凋亡相关，但后来的研究显示出Cideb是一个重要的脂滴表面蛋白，其定位于内质网和脂滴。载脂蛋白B（apolipoprotein B, apoB）是一种重要的载脂蛋白分子，是乳糜微粒（chylomicron，CM）和VLDL的关键分子。进一步的研究结果显示Cideb能够通过与apoB相互作用，促进极低密度脂蛋白（very low density lipoprotein，VLDL）的脂化过程，进而影响中性脂肪的分泌，同时Cideb参与了肝脏的脂肪代谢过程。然而，很多研究报道了Cideb表达于肾脏，且水平较高，但是其在肾脏的具体作用尚不明确。我们推测Cideb可能参与了肾小管的脂肪重吸收过程，但其具体作用以及可能的机制尚需深入研究。肾脏是一个机体物质代谢过程中的重要器官，并且很多肾脏疾病会出现脂质代谢的异常。比如肾病综合征、糖尿病肾病、尿毒症及肾移植术后。其中，以肾病综合征（nephrotic syndrome，NS）时的高脂血症最为突出。膜性肾病时，肾小球通透性增加，从而加重了肾小管重吸收的负担，因此可作为研究肾小管重吸收功能的重要模型。本课题以Cideb敲除小鼠模型，确定Cideb缺失对肾脏脂肪含量的影响；通过膜性肾病小鼠模型和人类膜性肾病标本，检测Cideb表达水平在膜性肾病中的变化；用过表达和沉默Cideb的细胞模型，确定Cideb对肾小管上皮细胞脂肪代谢过程的影响。本研究不仅有助于阐明Cideb在肾脏中的作用，同时对了解肾脏脂肪代谢过程也具有重要意义。研究目的：1）分析Cideb在肾脏中的表达水平以及分布规律，并确定Cideb敲除小鼠肾脏中脂肪含量的变化。2）检测膜性肾病肾穿刺标本和膜性肾病小鼠肾小管上皮细胞中Cideb表达水平，确定Cideb表达水平与肾小管重吸收功能之间的关系。3）运用过表达和沉默Cideb的肾小管上皮细胞，确定Cideb在肾小管上皮脂肪重吸收和分泌中的作用，探讨Cideb对肾小管上皮脂肪代谢的影响。研究方法：1）运用免疫组化技术，确定Cideb在肾脏中的表达水平和细胞分布情况，以及与载脂蛋白apoB在肾小管中的表达情况；2）通过Oil Red O染色和甘油三酯（triglyceride, TG）定量分析研究Cideb敲除小鼠肾脏内脂肪的变化，确定Cideb缺失肾小管上皮细胞脂肪含量的影响；3）尾静脉注射C-BSA建立膜性肾病的动物模型，通过血尿生化分析和各种组织学方法进行鉴定。运用免疫组化方法分析，肾病综合征小鼠肾小管上皮中Cideb和apoB的表达水平，并通过Oil Red O染色确定肾脏的脂肪含量变化；4）收集膜性肾病高脂血症患者的肾穿刺标本，通过免疫组化分析肾小管上皮Cideb、apoB的表达水平；5）通过不同浓度的棕榈酸刺激人类近端肾小管上皮细胞系HK-2细胞，通过Western blot、Bodipy493/503染色、TG定量分析等方法确定Cideb表达水平与肾小管上皮细胞内脂滴数量、脂肪含量的关系；6）用携带Cideb和Cideb siRNA的腺病毒感染HK-2细胞，建立Cideb过表达和沉默的HK-2细胞，通过Western blot、Bodipy493/503染色、TG定量分析等方法确定Cideb表达水平对肾小管上皮脂肪含量的影响；7）运用Transwell培养系统建立肾小管上皮重吸收体外模型，运用3H标记脂肪酸，测定Cideb对脂肪吸收的影响。研究结果：1）Cideb在肾小管上皮细胞中表达，且Cideb敲除小鼠肾脏脂肪含量增高。通过透射电镜观察到在小鼠的肾小管上皮细胞中有脂蛋白样的颗粒存在；免疫组化染色结果显示Cideb主要分布在肾小管上皮细胞中，且在近端小管中表达水平最高，而肾小球不表达Cideb。apoB在肾脏的表达情况与之类似。Oil Red O染色和TG定量分析发现Cideb缺失的小鼠肾脏中脂肪含量明显增加，结果提示Cideb参与了肾脏的脂肪代谢过程。2）在膜性肾病小鼠模型和膜性肾病患者中，肾小管中Cideb的表达水平明显升高。在膜性肾病时，肾小球的基底膜发生破坏，造成肾小球通透性明显增加，从而增强了肾小管的重吸收功能，因此膜性肾病也成为研究肾小管代谢的重要模型。在本研究中，我们通过尾静脉建立的小鼠模型和人膜性肾病的穿刺标本，发现Cideb和apoB的表达均升高。这些结果表明，在肾小管重吸收功能增加时，肾小管上皮细胞中Cideb表达水平增加，且与apoB的升高一致，这提示Cideb与肾小管的重吸收功能有关，且很可能参与了肾小管上皮细胞脂蛋白的代谢过程。3）Cideb能够抑制肾小管上皮细胞中脂肪储积，并促进脂肪的分泌过程。用不同浓度棕榈酸促进肾小管上皮细胞内脂肪的储积，结果显示能够提高细胞内Cideb表达水平。同时，运用腺病毒在HK-2细胞内过表达Cideb，用显示脂滴的Bodipy493/503染色，结果显示Cideb过表达能够降低细胞内TG的含量，减少胞浆内脂滴数量。然而，沉默Cideb可以显著提高细胞内TG的含量，增加细胞内脂滴数量增加。进一步，运用Transwell培养系统建立肾小管上皮重吸收体外模型，3H标记的脂肪酸测定肾小管上皮分泌脂蛋白的情况。结果显示，过表达Cideb能够抑制HK-2细胞内脂肪储积速度，促进HK-2细胞脂肪的分泌速度；抑制Cideb能够造成细胞内脂质储积，并抑制HK-2细胞的分泌过程。结果提示，Cideb能够促进肾小管上皮脂肪的分泌过程。结论：本研究首先确定了Cideb主要表达于肾小管上皮细胞，且在肾近曲小管上皮细胞中表达水平最高，且与apoB表达水平和肾小管重吸收功能一致；而Cideb缺失小鼠肾小管上皮细胞中脂肪含量明显增加。由于膜性肾病时肾小球通透性明显增加，因此我们在建立膜性肾病小鼠模型基础上，加上膜性肾病患者的穿刺标本，分析Cideb表达水平与膜性肾病之间的关系，结果显示Cideb在膜性肾病的肾小管上皮细胞中表达水平明显升高，并与apoB升高一致。为了进一步确定Cideb在肾小管上皮细胞中的具体作用和机制，我们运用过表达和沉默Cideb的腺病毒感染HK-2细胞，结果显示过表达Cideb能够抑制细胞内脂质储积，并促进肾小管上皮细胞脂质的分泌；相反沉默Cideb能够造成细胞内脂质的储积，而降低细胞TG的分泌速度。综上所述，本研究首次确定了Cideb主要表达于肾小管上皮细胞，并可能与肾小管上皮的重吸收功能有关。作为一个脂滴表面蛋白，Cideb能够促进肾小管上皮细胞TG的分泌，而抑制脂质的储积。我们推测Cideb在肾小管上皮细胞中发挥着与肝脏类似的功能，即参与了脂蛋白的形成和分泌过程，但具体机制有待深入研究。